| 穿膜肽KGF-2的构建及其对HaCaT增殖作用的影响 |
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| 引用本文： | 马岩岩,荣靖,彭鑫磊,刘秋英,舒辉萍,陈海佳,王一飞,任哲.穿膜肽KGF-2的构建及其对HaCaT增殖作用的影响[J].生物技术,2013,23(1):29-33. |
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| 作者姓名： | 马岩岩 荣靖 彭鑫磊 刘秋英 舒辉萍 陈海佳 王一飞 任哲 |
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| 作者单位： | 1. 暨南大学生物医药研究开发基地,广东省生物工程药物重点实验室,基因工程药物国家工程研究中心,广东广州510632
2. 广州赛莱拉生物科技有限公司,广东广州,510632 |
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| 基金项目： | 广东省教育部产学研结合项目，广州市科技重大专项 |
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| 摘 要： | 目的:构建穿膜肽KGF-2(TAT-KGF-2),研究其对人角质形成细胞HaCaT的增殖作用。方法:采用普通PCR技术和特殊引物从人胚胎肺成纤维细胞cDNA中扩增出目的基因TAT-KGF-2,并将其插入pET-28a(+)载体中构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒;将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白TAT-KGF-2;通过Ni-NTA柱纯化获得目标重组蛋白并利用Western blot进行鉴定;MTT法研究TAT-KGF-2对HaCa的增殖作用。结果:成功构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的人KGF-2基因序列同源性达到100%;获得穿膜肽KGF-2蛋白,分子量约为19 kDa,纯度达到95%以上;TAT-KGF-2对HaCaT在12.5ng/ml时具有增殖作用,并呈浓度依赖性,而且与不具有穿膜功能的KGF-2相比有更强的增殖效果。结论:成功纯化出TAT-KGF-2蛋白,并验证其对HaCaT具有增殖作用,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | KGF-2 穿膜肽 克隆 原核表达 纯化 HaCaT细胞株 |
Construction of TAT-KGF-2 and Its Proliferation Effect on Human Keratinocyte Cell Line HaCaT |
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| MA Yan-yan
,
RONG Jing
,
PENG Xin-lei
,
LIU Qiu-ying
,
SHU Hui-ping
,
CHE Hai-jia
,
WANG Yi-fei
,
REN Zhe.Construction of TAT-KGF-2 and Its Proliferation Effect on Human Keratinocyte Cell Line HaCaT[J].Biotechnology,2013,23(1):29-33. |
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| Authors: | MA Yan-yan RONG Jing PENG Xin-lei LIU Qiu-ying SHU Hui-ping CHE Hai-jia WANG Yi-fei REN Zhe |
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| Institution: | 1(1.Research and Development Center of Jinan University,Guangdong Key Laboratory of Bioengineering Medicine,National Engineering Research Center of Genetic Medicine,Guangzhou 510632,China;2.Guangzhou Salilai Biological Technology Co.Ltd.,Guangzhou 510632,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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