| 一种双脱氧核苷封闭的寡聚核苷酸制备方法北大核心 |
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| 引用本文： | 张梦玲,胡轶红,朱小立,张驰宇.一种双脱氧核苷封闭的寡聚核苷酸制备方法北大核心[J].生物技术,2017(6):545-551. |
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| 作者姓名： | 张梦玲 胡轶红 朱小立 张驰宇 |
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| 作者单位： | 1.上海大学生命科学学院200025;2.中国科学院上海巴斯德研究所病原诊断中心200031; |
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| 基金项目： | 国家科技重大专项("艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"；No.2017ZX10101001-005-001；No.2017ZX10103009-002) |
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| 摘 要： | 目的]建立一种高效、简便制备双脱氧核苷(ddATP、ddTTP、ddGTP和ddCTP)封闭寡聚核苷酸的方法。方法]选取乙醛脱氢酶(ALDH)基因,设计特异性上、下游引物。使用末端转移酶和碱性磷酸酶对引物进行双脱氧核苷修饰,利用荧光定量PCR对制备的封闭引物进行验证,并结合校读PCR对突变体进行检测。结果]经过ddNTP封闭的引物,在普通荧光PCR体系中无法进行引物延伸;在校读PCR体系中则可以区分ALDH2的两种等位基因。结论]该方法可以高效合成4种双脱氧核苷封闭的寡聚核苷酸,并且这种封闭的引物可以结合校读PCR对单核苷多态性进行检测。
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| 关 键 词： | 末端转移酶 磷酸酶 双脱氧核苷 寡聚核苷酸 单核苷酸多态性 |
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