| 人死亡结构域相关蛋白干扰载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 余斓,唐双阳,申海艳,伍虹蓉,朱翠明,万艳平.人死亡结构域相关蛋白干扰载体的构建与鉴定[J].生物技术,2018(4):341-344. |
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| 作者姓名： | 余斓 唐双阳 申海艳 伍虹蓉 朱翠明 万艳平 |
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| 作者单位： | 南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目("人乳头瘤病毒16型E2蛋白对Daxx调控细胞凋亡的影响"；No.81402169)；湖南省自然科学基金项目("Daxx对人乳头瘤病毒16型E2蛋白转录调控E6和E7的影响"；No.2018JJ3452)；特殊病原体防控湖南省重点实验室资助项目(湘科计字[2014]5号)；湖南省分子靶标新药研究协同创新中心资助项目(湘教通[2015]351号) |
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| 摘 要： | 目的]构建人死亡结构域相关蛋白(hDaxx)的干扰载体,为研究hDaxx在HPV致宫颈癌发生与发展过程中的作用提供实验基础。方法]以hDaxx全基因序列为模板,设计hDaxx RNA干扰引物并扩增干扰片段,将其连接到pGPU6/GFP/Neo真核表达载体,构建pGPU6/GFP/Neo-SiDaxx干扰载体,转染至HeLa细胞,利用荧光显微镜观察转染效率以及通过RT-PCR、Western Blot检测siRNA对HeLa细胞中hDaxx表达的影响。结果]在转染了pGPU6/GFP/Neo-Si Daxx载体的HeLa细胞中,其hDaxx mRNA和蛋白的表达水平与空载体对照组比较明显降低。结论]成功构建了hDaxx的干扰载体pGPU6/GFP/Neo-Si Daxx,该干扰载体能抑制HeLa细胞中hDaxx mRNA基因和蛋白的表达。
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| 关 键 词： | 死亡结构域相关蛋白 干扰 表达 抑制 |
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