鸡碳酸酐酶4基因在毕赤酵母中的表达 |
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引用本文: | 聂彬,黄华榕,韩燕国,姜勋平,刘桂琼.鸡碳酸酐酶4基因在毕赤酵母中的表达[J].生物技术,2015(3):233-237. |
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作者姓名: | 聂彬 黄华榕 韩燕国 姜勋平 刘桂琼 |
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作者单位: | 华中农业大学动物科技学院 |
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摘 要: | 目的]通过毕赤酵母的表达获得鸡碳酸酐酶4(CAⅣ)蛋白。方法]根据鸡CAⅣ的序列,结合毕赤酵母密码子的偏好性,合成CAⅣ基因。将CAⅣ基因克隆到pPICZαA真核表达载体,获得重组表达质粒pPICZαA-CAⅣ。将其电转毕赤酵母GS115后,获得重组毕赤酵母菌GS115/pPICZαA-CAⅣ。用终浓度为1%的甲醇对重组阳性菌进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Westernblot法检测蛋白的表达,并用Ni离子亲和层析法对表达出的蛋白进行纯化。结果]成功构建了表达载体pPICZαA-CAⅣ,转化重组酵母菌后可分泌出36kDa左右的CAⅣ蛋白,并通过Ni离子亲和层析法获得了单一性的目的蛋白CAⅣ。结论]获得分子量约36kDa的鸡CAⅣ蛋白。
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关 键 词: | 鸡 贮精腺 碳酸酐酶4 毕赤酵母 基因表达 |
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