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| 基于原核表达的副溶血性弧菌类毒素疫苗对海水鱼类免疫保护作用 | |
| 引用本文： | 王洪斌,李士虎,李信书,杨艳艳,阎斌伦.基于原核表达的副溶血性弧菌类毒素疫苗对海水鱼类免疫保护作用[J].生物技术,2011,21(4). |
| 作者姓名： | 王洪斌 李士虎 李信书 杨艳艳 阎斌伦 |
| 作者单位： | 1. 江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏连云港222005;淮海工学院海洋学院,江苏连云港222005 2. 淮海工学院海洋学院,江苏连云港,222005 3. 江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏连云港,222005 |
| 基金项目： | 国家星火计划项目，连云港市科技攻关项目 |
| 摘 要： | 目的:实现副溶血性弧菌溶血毒素基因tdh克隆与表达,并以表达产物TDH作免疫原,研究其对海水鱼免疫活性的影响.方法:PCR扩增tdh;构建重组质粒(pET-28-TDH)；IPTG诱导表达；SDS-PAGE检测:以纯化的TDH融合蛋白脱毒为类毒素免疫原免疫健康真鲷,测定其血清中过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(AKP)活性变化；用副溶血性弧菌病原攻毒,检测免疫保护作用.结果:tdh基因成功克隆并表达；表达蛋白相对分子量为21 kDa,证实为TDH蛋白；类毒素免疫真鲷后,其血清中总超氧化物歧化酶(T- SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和过氧化氢酶(CAT)活力在注射后48h、24h、24h、2Ah达到最高,最高点分别高于对照组77％、328％、75％、381％；72 h后均恢复至对照组水平.结论:类毒素对真鲷免疫系统具有明显的刺激作用；类毒素免疫后对攻毒的真鲷保护率达50％. |
| 关 键 词： | 副溶血性弧菌 类毒素 免疫活性 免疫保护 |
Vibrio parahaemotytifus' tdh Cloning & Expression and Study on the Toxoid Vaccine Protection of Marine Fish |
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| WANG Hong-bin,LI Shi-hu,LI Xin-shu,YANG Yan-yan,YAN Bin-lun.Vibrio parahaemotytifus' tdh Cloning & Expression and Study on the Toxoid Vaccine Protection of Marine Fish[J].Biotechnology,2011,21(4). | |
| Authors: | WANG Hong-bin LI Shi-hu LI Xin-shu YANG Yan-yan YAN Bin-lun |
| Institution: | WANG Hong-bin1,2,LI Shi-hu2,LI Xin-shu2,YANG Yan-yan2,YAN Bin-lun1(1.Jiangsu Key Laboratory of Marine Biotechnology,Lianyungang 222005,China,2.Marine College,Huaihai Institute of Technology,China) |
| Abstract: | Objective:To achieve Vibrio parahaemotytifus' tdh cloning and Prokaryotic expression,use expression products TDH as Immunogen,and study on the impact of Pagrus major immune activity.Method:Use PCR to amplify tdh.Create restructuring plasmid(pET-28-TDH) which can express TDH and induce it to express by IPTG.,using SDS-PAGE to identify the product.Use toxoid immunogen to which the TDH fusion protein has been detoxificated to immune the Pagrus major.Then identify the variance activity of CAT,ACP,SOD,AKP in the... |
| Keywords: | Vibrio parahaemotytifus toxoid immunocompetence immune protection |
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