| 溴化乙锭诱导无线粒体DNA宫颈癌HeLa细胞系的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 普元倩,李彬,王唯斯,严长宝,赵妤,张若鹏,熊伟.溴化乙锭诱导无线粒体DNA宫颈癌HeLa细胞系的构建和鉴定[J].生物技术,2019(1):77-83. |
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| 作者姓名： | 普元倩 李彬 王唯斯 严长宝 赵妤 张若鹏 熊伟 |
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| 作者单位： | 大理大学基础医学院;大理白族自治州第一人民医院病理科;大理大学第一附属医院生殖医学科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31601155;81560458);云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目(2017HB077);大理大学大学生创新创业计划项目(S-CXCY-2017-8);大理大学大学生科研基金项目(KYSX2018032);云南省教育厅科学研究基金项目(2016ZDX05) |
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| 摘 要： | 目的]构建和鉴定由溴化乙锭(EB)诱导的无线粒体DNA(mtDNA)宫颈癌ρ~0HeLa细胞系,探讨mtDNA与宫颈癌发生的关系。方法]采用含50ng/ml溴化乙锭、100μg/ml丙酮酸钠和50μg/ml尿嘧啶核苷的高糖DMEM完全培养基中传代培养HeLa细胞。低剂量EB连续诱导60d后,采用营养缺陷鉴定、PCR和WesternBlot鉴定无mtDNA的ρ~0HeLa细胞系;采用透射电子显微镜观察ρ~0HeLa细胞内线粒体形态变化;采用CCK8法测定ρ~0HeLa细胞增殖曲线。结果]经溴化乙锭诱导60d,可以培养出具有尿嘧啶核苷依赖性的无mtDNA宫颈癌HeLa细胞系。普通PCR和qPCR结果均显示,低剂量EB诱导60d的ρ~0HeLa细胞中mtDNA完全缺失。WesternBlot结果显示,HeLa细胞中能表达核编码的NDUFA9蛋白,也能表达线粒体编码MT-ND1蛋白。而ρ~0HeLa细胞中已无MT-ND1蛋白表达,但核编码的NDUFA9蛋白能够正常表达。透射电子显微镜观察显示,ρ~0HeLa细胞内部分出现空泡改变,线粒体嵴被破坏。CCK8细胞增殖实验结果显示,ρ~0HeLa细胞系生长速度显著低于正常HeLa细胞系,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论]无mtDNA的宫颈癌HeLa细胞系的建立,为后续研究mtDNA突变和线粒体功能在宫颈癌发生发展中的作用及机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 溴化乙锭 线粒体DNA 缺失 HELA细胞系 |
Establishment and identification of mitochondrial DNA-depleted HeLa cell line induced by ethidium bromide |
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| PU Yuan-qian,LI Bin,WANG Wei-si,YAN Chang-bao,ZHAO Yu,ZHANG Ruo-peng,XIONG Wei.Establishment and identification of mitochondrial DNA-depleted HeLa cell line induced by ethidium bromide[J].Biotechnology,2019(1):77-83. |
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| Authors: | PU Yuan-qian LI Bin WANG Wei-si YAN Chang-bao ZHAO Yu ZHANG Ruo-peng XIONG Wei |
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| Institution: | (College of Basic Medical Sciences,Dali University,Dali 671000,China;Department of Pathology,First People's Hospital of Dali Bai Prefecture,Dali 671000,China;Department of Reproductive Medicine,The First Affiliated Hospital of Dali University,Dali 671000,China) |
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| Abstract: | PU Yuan-qian;LI Bin;WANG Wei-si;YAN Chang-bao;ZHAO Yu;ZHANG Ruo-peng;XIONG Wei(College of Basic Medical Sciences,Dali University,Dali 671000,China;Department of Pathology,First People's Hospital of Dali Bai Prefecture,Dali 671000,China;Department of Reproductive Medicine,The First Affiliated Hospital of Dali University,Dali 671000,China) |
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| Keywords: | ethidium bromide mitochondrial DNA depletion HeLa cell line |
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