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| 对PCR扩增片段克隆操作的几点体会 | |
| 引用本文： | 徐东乎,施红.对PCR扩增片段克隆操作的几点体会[J].生物技术,1997,7(3):39-39. |
| 作者姓名： | 徐东乎 施红 |
| 作者单位： | 解放军302医院生物工程研究室!北京 |
| 摘 要： | PCR,技术的应用，极大方便了对已知序列基因某一片段的克隆，但在实际操作中某些容易忽视的因素有可能导致实验失败，以下将我们在这方面工作中的几点体会总结如下以供借鉴。1．引物设计。在引物5＇端设计酶切位点序列时一般要加保护碱基，如BamHI识别序列为5＇-GGATCC，应设计成5＇－CGGGATCC，这样才能保证下一步酶切反应的正常进行，因为5＇端裸露的位点往往不能为限制酶识别，具体何种位点加什么保护碱基可参阅NewEnglandBiolabs96／97Catalog或其它有关材料。2．片段处理。PCR扩增片段最好用酚：氯仿抽提以除尽Taq酶，单纯… |
| 关 键 词： | 聚合酶链反应 基因片段 扩增 克隆 |
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