| 新型瞬时报告载体pRSET-EGFP的构建及表达 |
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| 引用本文： | 逯家辉,孟庆繁,高朝辉,王艳平,王校楠,徐岩,麻越佳,杨亦代,滕利荣.新型瞬时报告载体pRSET-EGFP的构建及表达[J].生物技术,2004,14(6):1-3. |
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| 作者姓名： | 逯家辉 孟庆繁 高朝辉 王艳平 王校楠 徐岩 麻越佳 杨亦代 滕利荣 |
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| 作者单位： | 吉林大学生命科学学院,吉林,长春,130012 |
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| 基金项目： | 全国教育科学“十五”规划课题 (DIAO30 1 65) |
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| 摘 要： | 目的：利用分子生物学技术和方法将pRSET-B质粒改建为带有绿色荧光蛋白(GFP)突变体基因(GFP-S65T)的新型瞬时表达载体pRSET-EGFP，并在E．coli．BL21中得到GFP基因的高效表达。方法：PCR法从pEGFP质粒克隆GFP-S65T cDNA并在5’末端引入KpnⅠ的位点。将扩增出来的GFP-S65T基因和pRSEY-B质粒用HindⅢ和KpnⅠ双酶切后连接构成重组质粒。用化学法把重组质粒转化到E．coli．BL21中，培养发酵液。OD540=0．4时加入IPTG诱导GFP-S65T基因转录和表达，合成绿色荧光蛋白。还对诱导条件进行了优化，发酵液OD540=0．4加入IPTG可以得到最优表达。结果：通过Ni^2 柱亲和层析，纯化得到绿色荧光蛋白，SDS-PAGE电泳检测，分子量为27kDa，与文献报道值一致。这说明Ni^2 柱能够有效的纯化表达产物。结论：成功构建了新型瞬时表达载体pRSET-EGFP，并且在E．coli．BL21中得到高效表达。
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| 关 键 词： | 绿色荧光蛋白 GFP-S65T 基因表达 新型载体 |
| 文章编号： | 1004-311X(2004)06-0001-03 |
| 修稿时间： | 2004年7月25日 |
Construction of Novelty Plastid Transient Expression Vector pRSET - GFP and its Expression |
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| LU Jia-hui,MENG Qing-fan,GAO Chao-hui,WANG Yan-ping,WANG Xiao-nan,XU Yan,MA Yue-jia,YANG Yi-dai,TENG Li-rong.Construction of Novelty Plastid Transient Expression Vector pRSET - GFP and its Expression[J].Biotechnology,2004,14(6):1-3. |
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| Authors: | LU Jia-hui MENG Qing-fan GAO Chao-hui WANG Yan-ping WANG Xiao-nan XU Yan MA Yue-jia YANG Yi-dai TENG Li-rong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Green fluorescent protein GFP-S65T gene expression novelty vector |
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