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小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKX1原核表达载体的构建及表达
引用本文:马信,林爱玲,封德顺,王洪刚,田纪春.小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKX1原核表达载体的构建及表达[J].生物技术,2009,19(1).
作者姓名:马信  林爱玲  封德顺  王洪刚  田纪春
作者单位:1. 山东农业大学农学院,山东,泰安,271018:
2. 山东农业大学信息科学与工程学院,山东,泰安,271018
基金项目:中国博士后科学基金,山东省博士后创新专项资金项目 
摘    要:目的:构建小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKXI原核表达载体并进行表达,以期得到大量的His标签融合蛋白.方法:根据GenBank中的TaCKXI序列以及pET-24a载体中的多克隆位点设计引物,以含有TaCKXl编码基因的批pMD-QRCKXI重组质粒为模板,经PCR扩增得到TaCKXI基因的DNA片段.将所得的片段与pET-24a载体连接,转化DH5α大肠杆菌,筛选阳性克隆,其测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pET-TaCKXI已构建成功.提取per-TaCKXI质粒转化到BL21(DE3)pLysS表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件.结果:在大肠杆菌中获得TaCKXI基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为58.91kD;IPTG终浓度为0.5、1.0、1.5.2.0mmol/L时,诱导融合蛋白产量相差不大.选用0.5mmol/L诱导15h获得大量的融合蛋白.经用原核表达蛋白纯化试剂盒纯化,得到了单一的融合蛋白.结论:小麦TaCKXI基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为今后TaCKXI蛋白多克隆抗体的制备奠定了基础.

关 键 词:小麦  TaCKXI基因  原核表达  His融合蛋白

Construction of Prokaryotic Expression Vector of Wheat TaCKX1 Gene and Its Expression
MA Xin,LIN Ai-ling,FENG De-shun,WANG Hong-gang,TIAN Ji-chun.Construction of Prokaryotic Expression Vector of Wheat TaCKX1 Gene and Its Expression[J].Biotechnology,2009,19(1).
Authors:MA Xin  LIN Ai-ling  FENG De-shun  WANG Hong-gang  TIAN Ji-chun
Abstract:
Keywords:
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