| 新型rhNDPK-A工程菌的构建及表达产物纯化研究 |
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| 引用本文： | 冉延超,王一飞,熊盛,张美英,黄文韬,罗林波,刘秋英.新型rhNDPK-A工程菌的构建及表达产物纯化研究[J].生物技术,2004,14(2):6-8. |
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| 作者姓名： | 冉延超 王一飞 熊盛 张美英 黄文韬 罗林波 刘秋英 |
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| 作者单位： | 广州暨南大学生物医药基地,广东,广州,510632 |
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| 基金项目： | 国家十五“863”项目 (“基因工程重组蛋白Nm2 3 -H1 NDPK-A中试及临床前研究”,2 0 0 1AA2 1 50 4 1 )，广东省科委重大攻关项目 ,A1 0 90 2 0 7，广州市科委重大专攻 (99-Z - 0 0 7- 0 1 )，暨南大学青年基金资助项目,692 0 0 2 |
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| 摘 要： | 目的 :为简化纯化过程 ,获得有临床研究价值的rhNDPK -A蛋白 ,构建新型rhNDPK -A基因的表达质粒 ,利用 6×His标签以Ni+ -NTA亲和层析柱纯化蛋白。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒PBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中。IPTG诱导表达目的蛋白。通过镍离子螯合层析柱一步纯化法纯化目的蛋白。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列完全正确 ;目的蛋白在大肠杆菌M15中的表达量可达 4 9.6 % ;Ni+ -NTA亲和层析柱一步纯化后蛋白纯度为 93%。结论 :构建了带有 6×His纯化标签的新型rhNDPK -A基因表达质粒pQE -nm2 3H1,所构建质粒能高效表达目的蛋白 ,利用Ni+ -NTA亲和层析柱简便高效地纯化了表达产物。
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| 关 键 词： | 核苷二磷酸激酶 六组氨酸 基因表达 蛋白纯化 镍离子螯合层析柱 |
| 文章编号： | 1004-311X(2004)02-0006-03 |
| 修稿时间： | 2003年10月31 |
Construct New Type of Engineering Bacteria to Express rhNDPK-A and Study on Purification of Expressed Product |
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| RAN Yan-chao,WANG Yi-fei,XIONG Sheng,ZHANG Mei-ying,HUANG Wen-tao,LUO Lin-bo,LIU Qiu-ying.Construct New Type of Engineering Bacteria to Express rhNDPK-A and Study on Purification of Expressed Product[J].Biotechnology,2004,14(2):6-8. |
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| Authors: | RAN Yan-chao WANG Yi-fei XIONG Sheng ZHANG Mei-ying HUANG Wen-tao LUO Lin-bo LIU Qiu-ying |
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