| 黑曲霉Z6植酸酶基因phyA的克隆及表达 |
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| 引用本文： | 吴远征,扈进冬,李纪顺,杨合同.黑曲霉Z6植酸酶基因phyA的克隆及表达[J].生物技术,2008,18(6). |
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| 作者姓名： | 吴远征 扈进冬 李纪顺 杨合同 |
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| 作者单位： | 山东省科学院中日友好生物技术研究中心,山东济南,250014 |
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| 基金项目： | 济南市留学人员创业计划
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| 摘 要： | 目的:克隆植酸酶基因phyA,构建毕赤酵母表达载体,转化毕赤酵母,并对重组工程菌的表达产物进行初步酶学性质研究.方法:以植酸酶高产菌株-黑曲霉Z6染色体DNA为模板,PCR扩增得到植酸酶基因phyA,序列鉴定后连接到毕赤酵母穿梭载体pPIC9K上,构建重组质粒pPIC9K-phyA,电击转化毕赤酵母KM71,筛选得到重组转化子.对重组工程菌表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活性研究.结果:phyA序列分析表明该基因具有典型的植酸酶活性位点保守序列ArgHisGlyAlaArgTyrPro,与NC-BI已发表的植酸酶基因同源性较高,达到94%以上.该序列已提交GenBank,序列号为DQ318022.重组工程菌KM71-phyA7的PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中,植酸酶能有效分泌和表达,粗酶液酶活可达875U/mL.结论:植酸酶基因phyA在毕赤酵母中成功表达,为今后的定向改组奠定了基础.
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| 关 键 词： | 黑曲霉 植酸酶 phyA基因 毕赤酵母 分泌表达 |
Gene Cloning of phyA from Aspergillus niger Z6 and Its Expression in Pichia pastoris |
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| WU Yuan-zheng,HU Jin-dong,LI Ji-shun,YANG He-tong.Gene Cloning of phyA from Aspergillus niger Z6 and Its Expression in Pichia pastoris[J].Biotechnology,2008,18(6). |
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| Authors: | WU Yuan-zheng HU Jin-dong LI Ji-shun YANG He-tong |
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