| 犬冠状病毒大熊猫株核蛋白基因的克隆、序列分析及其在E.coli中的高效表达 |
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| 引用本文： | 乔军,夏咸柱,胡桂学,扈荣良,谢之景,闫芳,杨松涛,黄耕.犬冠状病毒大熊猫株核蛋白基因的克隆、序列分析及其在E.coli中的高效表达[J].兽类学报,2004,24(3):248-253. |
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| 作者姓名： | 乔军 夏咸柱 胡桂学 扈荣良 谢之景 闫芳 杨松涛 黄耕 |
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| 作者单位： | 1. 中国人民解放军军需大学军事兽医研究所,长春,130062
2. 吉林农业大学动物科技学院,长春,130118 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30000123) |
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| 摘 要： | 首次对犬冠状病毒大熊猫株(CCVGP)核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。本实验根据GenBank中报道的CCV Insavc-1株N蛋白基因序列，设计了一对特异性引物，对分离的CCVGP野毒株进行了RT—PCR扩增。将扩增的PCR产物纯化回收后与pGEM—T连接得到重组质粒pTN，进行核苷酸序列测定。结果该基因全长1146bp，编码382个氨基酸；与CCV标准毒株Insavc—1N基因相比，核苷酸的同源性为92．6％，推导的氨基酸的同源性为93．2％。在推导的N蛋白N端156—179位存在一个SRXX富集区，与小鼠肝炎病毒N蛋白相应区域相同，推测可能是RNA结合区。预测的GP株N蛋白疏水性和抗原表位与Insavc—1株N蛋白存在细微的差异。将pTN双酶切，回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET8a中构建了重组质粒pETN，转化大肠杆茵BL21，用IFTG进行了诱导表达。结果重组菌菌体裂解物经SDS—PAGE电泳可检测到相对分子量为48KD的重组蛋白，免疫印迹法证实该重组蛋白可以与CCV多克隆抗体发生特异性反应。经凝胶薄层扫描分析，重组N蛋白表达量可占菌体蛋白的49．3％，表达的蛋白纯化后可用于建立检测大熊猫CCV抗体间接ELISA用的包被抗原。
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| 关 键 词： | 犬冠状病毒大熊猫株 核蛋白基因 克隆 序列分析 纯化 |
| 文章编号： | 1000-1050(2004)03-0248-06 |
| 修稿时间： | 2003年11月19 |
Cloning,Sequence Analysis and Expression in E.coli of Nucleoprotein Gene of Canine Coronavirus Giant Panda Isolate |
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| QIAO JunXIA XianzhuHU GuixueHU RongliangXIE ZhijingYAN Fang YANG Songtao HUANG Geng.Cloning,Sequence Analysis and Expression in E.coli of Nucleoprotein Gene of Canine Coronavirus Giant Panda Isolate[J].Acta Theriologica Sinica,2004,24(3):248-253. |
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| Authors: | QIAO JunXIA XianzhuHU GuixueHU RongliangXIE ZhijingYAN Fang YANG Songtao HUANG Geng |
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| Institution: | QIAO Jun~1XIA Xianzhu~1HU Guixue~2HU Rongliang~1XIE Zhijing~1YAN Fang~1 YANG Songtao~1 HUANG Geng~1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Caninecoronavirusgiantpandaisolate Nucleoproteingene Cloning Sequenceanalysis |
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