| 丙型肝炎病毒NS5A基因在昆虫细胞中的表达及其分布研究 |
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| 引用本文： | 冯磊,叶林柏,等.丙型肝炎病毒NS5A基因在昆虫细胞中的表达及其分布研究[J].Virologica Sinica,2002,17(1):60-65. |
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| 作者姓名： | 冯磊 叶林柏 |
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| 摘 要： | 应用PCR方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒pBAC25中扩增出全长的NS5A基因DNA片段（约1.34kb)，PCR扩增NS5A基因片段克隆到转移载体plueBacHisA中。重组转移质粒pBlueBacHis5ADNA与野生型杆状病（AcNPV)DNA共转染SF-9昆虫细胞，通过空斑纯化获得带有NS5A基因的重组病AcNS5A，对重组病毒基因组DNA进行酶切和PCR鉴定，证实HCV NS5A基因已插入重组病毒基因组中，AcNS5A感染SF-9细胞后，在细胞中表达出一条64kD的蛋白，用Western-blot分析，结果表明这种蛋白与抗HVCHS5A特异性抗体发生强烈反应，说明NS5A基因已在细胞中得到表达，应用免疫荧光技术与免疫组化技术进一步研究NS5A蛋白在昆虫细胞中不同时间的表达情况及其分布，结果表明，NS5A蛋白在AcNS5A重组病毒感染细胞24h后主要分布在细胞质膜上，而在48h后则同时分布于细胞质膜和细胞核内，在72h则完全布满整个细胞，我们认为NS5A蛋白定位于质膜和细胞核中，暗示着在病毒复制过程中NS5A蛋白可能参与病毒RNA在质膜上复制和细胞基因表达的调控。
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| 关 键 词： | NCV NS5A 表达 免疫荧光 免疫组化 |
Study on Expression and Location of Hepatitis C Virus NS5A Protein in Insect Cells |
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| Keywords: | HCV NS5A Expression Immune fluorescence assay Immune h isto-assay |
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