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犬冠状病毒S蛋白主要抗原区基因片断的表达及免疫原性
引用本文:乔军,夏咸柱,胡桂学,杨松涛,赵忠鹏,谢之景,黄耕.犬冠状病毒S蛋白主要抗原区基因片断的表达及免疫原性[J].Virologica Sinica,2004,19(6):616-619.
作者姓名:乔军  夏咸柱  胡桂学  杨松涛  赵忠鹏  谢之景  黄耕
作者单位:[1]中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130062 [2]中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130062//塔里木大学动物科技学院,新疆阿拉尔843300 [3]吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30000123)
摘    要:应用Pichia pastoris酵母表达了犬冠状病毒大熊猫野毒株(CCV DXMV)S蛋白主要抗原区基因片断。用特异性引物扩增出CCV DXMV株S1基因片断,并将其克隆到pGEM-T载体中得到pTS1。用KpnI和Notl双酶切pTS1回收目的基因S1定向克隆到pPICZCαA中,构建出重组质粒pPICZCαAS1。将pPICZCαASl用SacI内切酶线性化后,电转化感受态GS115酵母细胞,用PCR法筛选阳性重组子。用1%的甲醇诱导重组酵母菌,取培养物上清进行重组蛋白的检测。结果重组酵母菌培养物上清用SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为106kDa大小的重组蛋白,Westem-blot证实该重组蛋白可以与CCV多克隆抗体发生特异性血清学反应。凝胶薄层扫描分析表明,3株重组酵母菌在1%甲醇诱导144h后,重组蛋白S1表达量约占培养物上清总蛋白量的6.6-8.6%左右。用重组蛋白S1免疫BALB/C小鼠3次后,小鼠血清CCV中和抗体可达1:8-1:16,表明重组S1蛋白具有一定的免疫原性。

关 键 词:犬冠状病毒  S蛋白主要抗原区  表达  免疫原性

Expression of the Major Antigenic Region Fragment of Spike Gene of Canine Coronavirus and Immunogenicity of Expressed Products
QIAO Jun,XIA Xian-zhu,HU Gui-xue,YANG Song-tao,ZHAO Zhong-peng,XIE Zhi-jing,HUANG Gen.Expression of the Major Antigenic Region Fragment of Spike Gene of Canine Coronavirus and Immunogenicity of Expressed Products[J].中国病毒学(英文版),2004,19(6):616-619.
Authors:QIAO Jun    XIA Xian-zhu  HU Gui-xue  YANG Song-tao  ZHAO Zhong-peng  XIE Zhi-jing  HUANG Gen
Institution:QIAO Jun1,3,XIA Xian-zhu1**,HU Gui-xue2,YANG Song-tao1,ZHAO Zhong-peng1,XIE Zhi-jing1,HUANG Gen1
Abstract:
Keywords:Canine coronavirus  Major antigenic region of spike protein  Expression  Immunogenicity
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