油茶3羟酰CoA脱水酶基因的克隆与表达分析 |
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引用本文: | 王建勇,谭晓风,曾艳玲,龙洪旭,陈鸿鹏,刘凯.油茶3羟酰CoA脱水酶基因的克隆与表达分析[J].植物生理学报,2014(10):1574-1584. |
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作者姓名: | 王建勇 谭晓风 曾艳玲 龙洪旭 陈鸿鹏 刘凯 |
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作者单位: | 中南林业科技大学,经济林培育与保护教育部重点实验室,经济林育种与栽培国家林业局重点实验室;国家林业局桉树研究开发中心;广西林业科学研究院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(31070603);湖南省自然科学基金(14JJ2104);中南林业科技大学青年基金重点项目(QJ2011008A) |
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摘 要: | 3羟酰CoA脱水酶是一类催化3羟酰CoA脱水转化成为烯酰CoA形式的酶。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,克隆到一个油茶3羟酰CoA脱水酶基因的cDNA全长,命名为CoHCD(Gen Bank登录号KJ910336)。该基因cDNA全长为1145bp,含有666bp的开放读码框,编码221个氨基酸,分子量为25.2kDa,理论等电点p I为9.4,疏水残基占整个氨基酸残基的48.9%,是亲水性蛋白,具有4个比较明显的跨膜区和蛋白质酪氨酸磷酸酶基序"HGXXGXXRS"。在基因c DNA全长序列的基础上,分别成功地构建了原核表达载体、超表达载体和RNA干扰载体,其中,原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得表观分子量约为25 k Da的相应目的蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,在5个不同发育时期的油茶种子中CoHCD高效表达主要集中在8~10月,转录最高峰发生在9月,其表达量在种子发育过程中呈增加趋势。
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关 键 词: | 油茶 3羟酰CoA脱水酶 克隆 表达分析 |
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