| 香蕉条斑病毒云南河口分离物开放阅读框Ⅱ的原核表达、融合蛋白纯化及抗血清制备 |
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| 引用本文： | 林湛松,王健华,刘志昕.香蕉条斑病毒云南河口分离物开放阅读框Ⅱ的原核表达、融合蛋白纯化及抗血清制备[J].生物学杂志,2011,28(5):50-54. |
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| 作者姓名： | 林湛松 王健华 刘志昕 |
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| 作者单位： | 1. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海口,571101;海南大学环境与植物保护学院,儋州,571737
2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海口,571101 |
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| 基金项目： | 国家自然基金项目，中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 |
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| 摘 要： | 以课题组保存的连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒河口分离物全基因组为模板,设计一对特异引物,经过PCR扩增,切胶回收,并通过与pET32(b)载体共同双酶切及T4连接酶连接,得到重组载体pET32-ORF2。将获得的重组质粒pET32-ORF2转化表达菌株E.coli BL21(DE3)感受态细胞,得到表达BSV的ORFⅡ的工程菌。经0.1mmol/L的IPTG诱导表达,超声波破碎后,获得的融合蛋白大多为包含体,但仍有少部分为可溶性蛋白可以进行后续的纯化步骤。将上述可溶性融合蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,获得纯度较高的融合蛋白。以纯化蛋白作为抗原免疫家兔,得到特异性抗血清。间接ELISA以及western blotting表明,所得抗血清效价和特异性都较高,可以用于检测。为BSV的快速检测以及一些相关后续理论研究工作奠定了一定基础。
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| 关 键 词： | 香蕉条斑病毒 原核表达 ELISA western blotting |
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