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| 北京油鸡ADSL基因的克隆、表达及其结构与功能分析 | |
| 引用本文： | 刘长青,刘帅,包阿东,陆涛峰,吴宏梅,张洪海,唐学玺,关伟军,马月辉.北京油鸡ADSL基因的克隆、表达及其结构与功能分析[J].动物学研究,2008,29(4):353-362. |
| 作者姓名： | 刘长青 刘帅 包阿东 陆涛峰 吴宏梅 张洪海 唐学玺 关伟军 马月辉 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100094;中国海洋大学,海洋生命学院,青岛,266003 2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100094;内蒙占农业大学,动物科学与医学学院,呼和浩特,010018 3. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100094 4. 曲阜师范大学,研究生处,曲阜,273165 5. 中国海洋大学,海洋生命学院,青岛,266003 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
| 摘 要： | 采用RT-PCR与RACE方法扩增出北京油鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因全长cDNA序列,亚克隆和序列分析结果表明:该基因开放阅读框长为1455个碱基,编码485个氨基酸;5'端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在临近起始密码子27号碱基发生C→T突变,该突变使得本来小是核呼吸因子2(NRF-2)结合位点的CTCC突变为NRF-2结合位点CTTC.将ADSL基因完整斤放阅读框重组至融合表达载体pGEX-4T-l中,构建成北京油鸡ADSL基因融合表达载体pOEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示重组融合蛋白在约80.5kD处有特异蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79.该蛋白的表达最随诱导时间的延长而增加,5h达最高值,达到细胞总蛋白的26.9%,且主要以不可溶的包涵体形式存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后Western blotting检测表明其为北京油鸡ADSL蛋白,为其进一步的生物学功能及其应用研究鉴定基础. |
| 关 键 词： | 北京油鸡 腺苷酸琥珀酸裂解酶 结构分析 基因表达 |
| 收稿时间： | 2008-3-11 |
Molecular Clone, Expression, Structure and Function Study of Beijing Fatty Chicken ADSL Gene |
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| LIU Chang-qing,LIU Shuai,BAO A-dong,LU Tao-feng,WU Hong-mei,ZHANG Hong-hai,TANG Xue-xi,GUAN Wei-jun,MA Yue-hui.Molecular Clone, Expression, Structure and Function Study of Beijing Fatty Chicken ADSL Gene[J].Zoological Research,2008,29(4):353-362. | |
| Authors: | LIU Chang-qing LIU Shuai BAO A-dong LU Tao-feng WU Hong-mei ZHANG Hong-hai TANG Xue-xi GUAN Wei-jun MA Yue-hui |
| Abstract: | |
| Keywords: | Beijing fatty chicken Adenylosuccinate lyase Structure analysis Gene expression |
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