不同防冻剂对兔胚胎干细胞慢速冷冻保存的影响

干细胞冷冻保存是干细胞研究和临床应用中的必需技术。为提高兔胚胎干细胞在慢速冻存过程中的保存效果，比较了二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(ethylene glycol，EG)对兔胚胎干细胞冷冻保护效果。对冷冻复苏后的细胞进行台盼蓝染色，并研究其胚胎干细胞分子特性，结果表明DMSO比EG具有更好的冷冻保护效果。再在以10% DMSO为基础的防冻液中添加膜稳定剂海藻糖(trehalose)或谷氨酰胺(glutamine)，细胞冷冻复苏后结果显示，谷氨酰胺对兔胚胎干细胞有明显的冷冻保护作用，使细胞存活率从71%提高到83.7%。当谷氨酰胺浓度为0、5、10、20、40 mmol/L分别加入防冻液中后，20 mmol/L的谷氨酰胺具有最佳的冷冻保护效果。以上结果得出兔胚胎干细胞慢速冷冻的防冻液改进配方为：在胚胎干细胞培养液中添加10% DMSO＋20 mmol/L谷氨酰胺。