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树鼩肝细胞体外分离培养体系的复建及主要影响因素分析
引用本文:张顶,高丽,张远旭,孙丽,冯悦,何有文,夏雪山,张华堂.树鼩肝细胞体外分离培养体系的复建及主要影响因素分析[J].动物学研究,2009,30(1):24-30.
作者姓名:张顶  高丽  张远旭  孙丽  冯悦  何有文  夏雪山  张华堂
作者单位:1. 中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室,免疫生物学实验室和人类疾病灵长类动物模型研究团队,云南,昆明,650223;中国科学院研究生院,北京100049
2. 昆明理工大学生物与化学工程学院,云南,昆明,650224
3. 中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室,免疫生物学实验室和人类疾病灵长类动物模型研究团队,云南,昆明,650223
基金项目:国家重点基础研究发展规划(973计划),南省科技条件平台建殴计划项目 
摘    要:树鼩(Tupaia Belangeri)与人和灵长类亲缘关系较为接近,是乙型肝炎研究中备受关注的小动物模型,而其原代肝细胞的分离和培养则是建立HBV体外感染模型及应用和基础研究的关键的第一步,但由于以往的文献报道均较为简要,需要较长时间的摸索。本研究通过与机械分离法的直接比较,验证了两步灌注法在树鼩肝细胞分离中的优越性。进而发现,在分离后的体外培养过程中,二甲基亚砜不仅能够促进和维持原代肝细胞的分化,而且能够显著地抑制纤维状细胞群的出现。同时,肝细胞生长因子(HGF)和表皮生长因子(EGF)能够促进肝细胞在体外长期存活。在此优化的条件下,原代培养可持续4—5周,并且较多的细胞聚集形成类似肝窦结构的形态,从而为乙型肝炎病毒感染机理研究和药物筛选提供了必备的先决条件,也为丙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒及单纯疱疹病毒等研究和药物筛选提供了可能。

关 键 词:树鼩  肝细胞  二甲基亚砜  肝细胞生长因子  表皮生长因子  分化
收稿时间:2008-8-29

Crucial Factors for de novo Establishment of Long-term Primary Culture of Tree Shrew Hepatocytes
ZHANG Ding,GAO Li,ZHANG Yuan-xu,SUN Li,FENG Yue,HE You-wen,XIA Xue-shan,ZHANG Hua-tang.Crucial Factors for de novo Establishment of Long-term Primary Culture of Tree Shrew Hepatocytes[J].Zoological Research,2009,30(1):24-30.
Authors:ZHANG Ding  GAO Li  ZHANG Yuan-xu  SUN Li  FENG Yue  HE You-wen  XIA Xue-shan  ZHANG Hua-tang
Institution:1.Immunobiology Laboratory and Overseas Team;Key Laboratory of Animal Model and Human Disease Mechanisms;Kunming Institute of Zoology;the Chinese Academy of Science;Kunming 650223;China;2.Graduate University of Chinese Academy of Science;Beijing 100049;3.College of Chemistry and Biology;Kunming University of Science and Technology;Kunming 650224;China
Abstract:Tree shrews(Tupaia Belangeri)are phenogenetically close to humans and primates and generally recognized as a prominent small animal model for studies of heptitis virus type B(HBV).Isolating and culturing tree shrew hepatocytes is the first key step toward the cellular model of HBV infection in vitro.Due to the lack of details in previous reports, establishing the model has been a matter of arbitary experiences.In this study, we validated the superiority of perfusion over mechanic dispersion for hepatocyte s...
Keywords:Tree shrew  Hepatocytes  Dimethyl sulphoxide  Hepatocyte growth factor  Epidermal growth factor  Differentiation  
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