| 柑橘黄龙病菌内参基因的筛选与评估 |
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| 引用本文： | 郑永钦,郑正,陈燕玲,黄洪霞,许美容.柑橘黄龙病菌内参基因的筛选与评估[J].微生物学通报,2019,46(11):2985-2995. |
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| 作者姓名： | 郑永钦 郑正 陈燕玲 黄洪霞 许美容 |
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| 作者单位： | 华南农业大学柑橘黄龙病研究室 广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室 广东 广州 510642,华南农业大学柑橘黄龙病研究室 广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室 广东 广州 510642,华南农业大学柑橘黄龙病研究室 广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室 广东 广州 510642,华南农业大学柑橘黄龙病研究室 广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室 广东 广州 510642,华南农业大学柑橘黄龙病研究室 广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室 广东 广州 510642 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2018YFD0201500)；广东省科技计划(2017A0303030066)；广西科技重大专项(桂科AA18118046) |
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| 摘 要： | 【背景】柑橘黄龙病是世界柑橘生产上最具毁灭性的病害之一,主要由候选韧皮部杆菌属亚洲种("Candidatus Liberibacter asiaticus",CLas)引起。CLas全基因组测序已经完成,因而该病原菌的基因表达研究和功能验证得以进行。【目的】筛选CLas内参基因并评估其不同侵染时期和在不同品种植物寄主中的表达稳定性。【方法】基于基因功能类别,利用实时荧光定量PCR技术分析23个CLas的候选内参基因相对表达情况(16Sr RNA基因作为参照基因)。结合Ct值标准差和geNorm、NormFinder、RefFinder软件,评价内参基因的表达稳定性。【结果】在感染黄龙病不同时期和不同品种的植物寄主样本中,14对引物表现出较强的特异性和稳定性。内参基因稳定性排名:ftsZgyrArpoB1ftsAsecAgapzapEgmk2rpoDsecYrpoOftsWgmk1recA,根据geNorm配对变异值Vn/n+1选择稳定性最好的ftsZ和gyrA作为内参基因作进一步评估。以ftsZ+gyrA以及16S rRNA基因分别作为内参基因检测柑橘黄龙病菌致病基因LasΔ5313的表达水平,所得的表达模式相同。【结论】柑橘黄龙病菌中涉及DNA复制和细胞分裂功能的管家基因表达较稳定,在CLas的基因表达研究中可选择ftsZ+gyrA的基因组合作为内参。本研究为后续利用实时荧光定量PCR分析CLas基因表达及研究CLas致病机理奠定基础。
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| 关 键 词： | 柑橘黄龙病，候选韧皮部杆菌亚洲种，实时荧光定量PCR，内参基因 |
Screening and evaluation of reference genes for Candidatus Liberibacter asiaticus |
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| ZHENG Yong-Qin,ZHENG Zheng,CHEN Yan-Ling,HUANG Hong-Xia and XU Mei-Rong.Screening and evaluation of reference genes for Candidatus Liberibacter asiaticus[J].Microbiology,2019,46(11):2985-2995. |
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| Authors: | ZHENG Yong-Qin ZHENG Zheng CHEN Yan-Ling HUANG Hong-Xia and XU Mei-Rong |
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| Institution: | College of Agriculture, South China Agricultural University/Guangdong Province Key Laboratory of Microbial Signals and Disease Control, Guangzhou, Guangdong 510642, China,College of Agriculture, South China Agricultural University/Guangdong Province Key Laboratory of Microbial Signals and Disease Control, Guangzhou, Guangdong 510642, China,College of Agriculture, South China Agricultural University/Guangdong Province Key Laboratory of Microbial Signals and Disease Control, Guangzhou, Guangdong 510642, China,College of Agriculture, South China Agricultural University/Guangdong Province Key Laboratory of Microbial Signals and Disease Control, Guangzhou, Guangdong 510642, China and College of Agriculture, South China Agricultural University/Guangdong Province Key Laboratory of Microbial Signals and Disease Control, Guangzhou, Guangdong 510642, China |
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