| 巴斯德毕赤酵母Orm1蛋白在细胞生长和内质网功能维持方面的功能 |
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| 引用本文： | 梁晨,张萌,喻其林,邢来君,李明春.巴斯德毕赤酵母Orm1蛋白在细胞生长和内质网功能维持方面的功能[J].微生物学通报,2017,44(4):755-765. |
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| 作者姓名： | 梁晨 张萌 喻其林 邢来君 李明春 |
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| 作者单位： | 南开大学生命科学学院微生物系 分子微生物学与技术教育部重点实验室 天津 300071,南开大学生命科学学院微生物系 分子微生物学与技术教育部重点实验室 天津 300071,南开大学生命科学学院微生物系 分子微生物学与技术教育部重点实验室 天津 300071,南开大学生命科学学院微生物系 分子微生物学与技术教育部重点实验室 天津 300071,南开大学生命科学学院微生物系 分子微生物学与技术教育部重点实验室 天津 300071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 31270096) |
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| 摘 要： | 【目的】鉴定巴斯德毕赤酵母ORM1基因;研究ORM1基因缺失对毕赤酵母生长、内质网压力应答、细胞钙稳态调节和活性氧水平等方面的影响。【方法】利用生物信息学软件对毕赤酵母Orm1蛋白进行序列比对和分析;利用PCR介导的同源重组法构建orm1Δ缺失菌株,将回补质粒p IB1-ORM1转入orm1Δ菌株构建回补菌株;研究ORM1基因缺失对毕赤酵母生长的影响;以Fluo-3 AM染色法测定胞质钙含量;以DCFH-DA染色法分析胞内活性氧水平;以实时荧光定量PCR技术研究ORM1基因缺失对毕赤酵母非折叠蛋白应答、钙稳态和抗氧化系统基因表达的影响;使用试剂盒分析毕赤酵母抗氧化系统过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及谷胱甘肽(GSH)的含量。【结果】在毕赤酵母基因组数据库中比对出酿酒酵母Orm1和Orm2的同源蛋白,并将该蛋白编码基因命名为ORM1;毕赤酵母ORM1基因缺失导致细胞生长受到明显抑制,对衣霉素引起的内质网压力敏感性增强,非折叠蛋白应答激活,细胞钙稳态紊乱,活性氧积累,抗氧化系统激活。【结论】由于非折叠蛋白应答、钙稳态调节、活性氧积累等均与内质网功能息息相关,因此,巴斯德毕赤酵母ORM1基因编码的Orm1蛋白在细胞生长及内质网正常功能的维持过程中发挥重要作用。
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| 关 键 词： | 巴斯德毕赤酵母，Orm，内质网压力，钙稳态，活性氧 |
Function of Pichia pastoris Orm1 in cell growth and endoplasmic reticulum function maintenance |
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| LIANG Chen,ZHANG Meng,YU Qi-Lin,XING Lai-Jun and LI Ming-Chun.Function of Pichia pastoris Orm1 in cell growth and endoplasmic reticulum function maintenance[J].Microbiology,2017,44(4):755-765. |
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| Authors: | LIANG Chen ZHANG Meng YU Qi-Lin XING Lai-Jun and LI Ming-Chun |
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| Institution: | Key laboratory of Molecular Microbiology and Technology, Department of Microbiology, College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,Key laboratory of Molecular Microbiology and Technology, Department of Microbiology, College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,Key laboratory of Molecular Microbiology and Technology, Department of Microbiology, College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,Key laboratory of Molecular Microbiology and Technology, Department of Microbiology, College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China and Key laboratory of Molecular Microbiology and Technology, Department of Microbiology, College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris Orm Endoplasmic reticulum stress Calcium homeostasis Reactive oxygen species |
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