| 非洲猪瘟病毒微滴数字PCR (ddPCR)方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 邬旭龙,肖璐,宋勇,林华,陈世界,杨苗,安微,姚学萍,杨泽晓,王印.非洲猪瘟病毒微滴数字PCR (ddPCR)方法的建立及应用[J].微生物学通报,2017,44(12):2839-2846. |
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| 作者姓名： | 邬旭龙 肖璐 宋勇 林华 陈世界 杨苗 安微 姚学萍 杨泽晓 王印 |
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| 作者单位： | 1. 四川农业大学 动物医学院 动物检疫实验室 四川 成都 611130,2. 四川省畜牧科学研究院 四川 成都 610066,5. 天津瑞普生物技术股份有限公司 天津 300381,4. 四川出入境检验检疫局 检验检疫技术中心 四川 成都 610041,4. 四川出入境检验检疫局 检验检疫技术中心 四川 成都 610041,4. 四川出入境检验检疫局 检验检疫技术中心 四川 成都 610041,4. 四川出入境检验检疫局 检验检疫技术中心 四川 成都 610041,1. 四川农业大学 动物医学院 动物检疫实验室 四川 成都 611130; 3. 四川农业大学 动物疫病与人类健康四川省重点实验室 四川 成都 611130,1. 四川农业大学 动物医学院 动物检疫实验室 四川 成都 611130; 3. 四川农业大学 动物疫病与人类健康四川省重点实验室 四川 成都 611130,1. 四川农业大学 动物医学院 动物检疫实验室 四川 成都 611130; 3. 四川农业大学 动物疫病与人类健康四川省重点实验室 四川 成都 611130 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目(No. 2013BAD12B04) |
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| 摘 要： | 【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)能导致猪群高死亡率,从而造成严重的经济损失。因此,建立严密、高效的防控系统,包括灵敏、准确的诊断方法以及高效的预报预警机制等,以避免ASF传入我国。本文旨在建立一种新型而高灵敏度的ASFV微滴数字PCR(Droplet digital PCR,dd PCR)检测方法。【方法】针对ASFV K205R基因设计一对特异性引物和Taq Man探针,通过反应条件优化,建立了ASFV实时荧光定量PCR(q PCR)和dd PCR检测方法;并对两种方法的线性关系、灵敏性、特异性和重复性进行了评估,利用建立的ASFV检测方法对163份国内和进境的组织样本及血清样本进行检测,血清样本经商品化ASFV ELISA试剂盒复检,评估不同方法检测结果的符合率。【结果】建立的ASFV q PCR和dd PCR检测方法线性关系较好(R2≥0.998),dd PCR的最低检测限度可达到0.36拷贝,在20μL反应体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是q PCR的10倍。ASFV dd PCR检测方法具有很高的特异性和重复性,不与其他猪常见病毒发生交叉反应。【结论】该方法灵敏度高、特异性强,可作为一种有效的分子生物学方法来诊断ASFV,为防止该病传入我国以及ASFV的实时监测提供新的技术储备,同时促进dd PCR技术在我国的发展和应用。
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| 关 键 词： | 微滴数字PCR，实时荧光定量PCR，非洲猪瘟病毒，诊断调查 |
A novel high-sensitivity droplet digital PCR (ddPCR) for detection of African swine fever virus |
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| WU Xu-Long,XIAO Lu,SONG Yong,LIN Hu,CHEN Shi-Jie,YANG Miao,AN Wei,YAO Xue-Ping,YANG Ze-Xiao and WANG Yin.A novel high-sensitivity droplet digital PCR (ddPCR) for detection of African swine fever virus[J].Microbiology,2017,44(12):2839-2846. |
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| Authors: | WU Xu-Long XIAO Lu SONG Yong LIN Hu CHEN Shi-Jie YANG Miao AN Wei YAO Xue-Ping YANG Ze-Xiao and WANG Yin |
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| Institution: | 1. College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu, Sichuan 611130, China,2. Sichuan Animal Science Academy, Chengdu, Sichuan 610066, China,5. Tianjin Ringpu Bio-technology Co., Ltd, Tianjin 300381, China,4. Sichuan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Chengdu, Sichuan 610041, China,4. Sichuan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Chengdu, Sichuan 610041, China,4. Sichuan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Chengdu, Sichuan 610041, China,4. Sichuan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Chengdu, Sichuan 610041, China,1. College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu, Sichuan 611130, China; 3. Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province, Sichuan Agricultural University, Chengdu, Sichuan 611130, China,1. College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu, Sichuan 611130, China; 3. Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province, Sichuan Agricultural University, Chengdu, Sichuan 611130, China and 1. College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu, Sichuan 611130, China; 3. Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province, Sichuan Agricultural University, Chengdu, Sichuan 611130, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Droplet digital PCR Real-time quantitative PCR African swine fever virus Diagnostic investigation |
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