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| 苏云金芽胞杆菌高效表达载体的构建 | |
| 引用本文： | 李朝睿,杜立新,彭琦,梁影屏,高继国,张杰,宋福平.苏云金芽胞杆菌高效表达载体的构建[J].微生物学通报,2013,40(2):350-361. |
| 作者姓名： | 李朝睿 杜立新 彭琦 梁影屏 高继国 张杰 宋福平 |
| 作者单位： | 1. 东北农业大学 生命科学学院 黑龙江 哈尔滨 150030;中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室 北京 100193 2. 中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室 北京 100193;河北农林科学院植物保护研究所 河北 保定 071000 3. 中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室 北京 100193 4. 东北农业大学 生命科学学院 黑龙江 哈尔滨 150030 |
| 基金项目： | 国家973计划项目(No. 2009CB118902); 国家自然科学基金项目(No. 31070083) |
| 摘 要： | 目的]通过比较cry1A、cry3A、cry4A和cry8E四个基因的启动子转录活性,筛选出一个强启动子,利用强启动子构建一个苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)高效表达载体.方法]利用启动子融合lacZ技术检测了4种启动子的转录活性.通过扫描电子显微镜观察晶体、SDS-PAGE、蛋白定量和生物活性测定等方法对新建高效表达载体进行功能验证.结果]构建了Pcry1A、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E4个启动子融合报告基因lacZ的表达载体,经β-半乳糖苷酶活性分析得知,启动子活性从高到低依次为Pcry8E＞Pcry1A＞Pcry4A＞Pcry3A.选取cry8E启动子,以pHT315作为基础载体构建苏云金芽胞杆菌高效表达载体pHT315-8E21b,将cry1Ac基因连接到pHT315-8E21b和广泛应用的cry3A启动子指导的pSXY-422b上,分别转入无晶体突变株HD-73-,获得菌株HD-8E1Ac和HD-422-1Ac.扫描电子显微镜观察显示,HD-8E1Ac菌株可以形成菱形晶体,说明正确表达了cry1Ac基因.SDS-PAGE分析结合蛋白定量实验表明pHT315-8E21b表达效率高于pSXY-422b.对小菜蛾(Plutella xylostella)的生物活性测定表明HD-8E1Ac菌株对小菜蛾有生物活性,且菌株活性高于HD-422-1Ac.结论]利用强启动子Pcry8E构建了一个能在Bt中高效表达的穿梭载体pHT315-8E21b,该载体可正确表达cry1Ac基因,其表达效率高于被广泛应用的pSXY422b. |
| 关 键 词： | 苏云金芽胞杆菌 cry8E启动子 cry3A启动子 表达载体 |
Construction of high-level expression vector for Bacillus thuringiensis |
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| LI Chao-Rui,DU Li-Xin,PENG Qi,LIANG Ying-Ping,GAO Ji-Guo,ZHANG Jie and SONG Fu-Ping.Construction of high-level expression vector for Bacillus thuringiensis[J].Microbiology,2013,40(2):350-361. | |
| Authors: | LI Chao-Rui DU Li-Xin PENG Qi LIANG Ying-Ping GAO Ji-Guo ZHANG Jie and SONG Fu-Ping |
| Institution: | 1. College of Life Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin, Heilongjiang 150030, China 2. State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;2. State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China 3. Institute of Plant Protection, Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences, Baoding, Hebei 071000, China;2. State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;1. College of Life Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin, Heilongjiang 150030, China;2. State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Bacillus thuringiensis cry8E promoter cry3A promoter Expression vector |
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