| 实时荧光定量TaqMan-MGB探针法检测杆菌样巴尔通体 |
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| 引用本文： | 栗冬梅,刘云彦,杜鹏程,宋秀平,刘起勇.实时荧光定量TaqMan-MGB探针法检测杆菌样巴尔通体[J].微生物学通报,2015,42(2):427-435. |
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| 作者姓名： | 栗冬梅 刘云彦 杜鹏程 宋秀平 刘起勇 |
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| 作者单位： | 1. 中国疾病预防控制中心 传染病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室 北京 102206,1. 中国疾病预防控制中心 传染病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室 北京 102206；2. 山东大学 生命科学院 山东 济南 250100,1. 中国疾病预防控制中心 传染病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室 北京 102206,1. 中国疾病预防控制中心 传染病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室 北京 102206,1. 中国疾病预防控制中心 传染病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室 北京 102206 |
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| 基金项目： | 十二五重大专项课题项目(No. 2013ZX10004-101, 2012ZX10004219-002) |
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| 摘 要： | 【目的】应用Taq Man探针实时荧光定量PCR技术建立特异性强、敏感性高和稳定性好的快速杆菌样巴尔通体检测方法。【方法】应用生物信息学方法查找杆菌样巴尔通体特有基因,从中筛选出一段特有的基因序列为模板设计探针和引物。通过比较Ct值和荧光强度确定扩增反应的最佳退火温度、探针和引物浓度;将扩增产物连接到p EASY-T载体上制备标准品,绘制标准曲线,分析扩增效率和线性关系;评估方法的特异性、敏感性及重复性。【结果】优化后退火温度为60°C,探针和引物浓度均为200 nmol/L,反应体系20μL。特异性实验显示只有杆菌样巴尔通体扩增出荧光信号,其他种属细菌均未见荧光信号;标准曲线线性关系良好(R2=1),扩增效率E=98.18%;最低检出限为每个PCR反应3个拷贝;组内和组间的变异系数CV值分别为0.21%–0.42%和0.29%–0.59%,在允许范围内。【结论】研究建立的实时荧光定量Taq Man-MGB探针法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可快速检测鉴定杆菌样巴尔通体,为这种巴尔通体所引起的一系列疾病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。
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| 关 键 词： | 杆菌样巴尔通体 卡瑞恩病 实时荧光定量PCR Taq Man探针 生物信息学 |
Detection of Bartonella bacilliformis by real-time PCR with TaqMan-MGB probe |
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| LI Dong-Mei,LIU Yun-Yan,DU Peng-Cheng,SONG Xiu-Ping and LIU Qi-Yong.Detection of Bartonella bacilliformis by real-time PCR with TaqMan-MGB probe[J].Microbiology,2015,42(2):427-435. |
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| Authors: | LI Dong-Mei LIU Yun-Yan DU Peng-Cheng SONG Xiu-Ping and LIU Qi-Yong |
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| Institution: | 1. State Key Laboratory for Infectious Diseases Prevention and Control, National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China,1. State Key Laboratory for Infectious Diseases Prevention and Control, National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China; 2. School of Life Sciences, Shandong University, Jinan, Shandong 250100, China,1. State Key Laboratory for Infectious Diseases Prevention and Control, National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China,1. State Key Laboratory for Infectious Diseases Prevention and Control, National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China and 1. State Key Laboratory for Infectious Diseases Prevention and Control, National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China |
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| Abstract: | |
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