| 高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b5还原酶I的克隆、表达和功能鉴定 |
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| 引用本文： | 王明轩,陈海琴,顾震南,陈卫,陈永泉.高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b5还原酶I的克隆、表达和功能鉴定[J].微生物学通报,2016,43(10):2172-2178. |
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| 作者姓名： | 王明轩 陈海琴 顾震南 陈卫 陈永泉 |
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| 作者单位： | 江南大学食品学院 食品科学与技术国家重点实验室 江苏 无锡 214122,江南大学食品学院 食品科学与技术国家重点实验室 江苏 无锡 214122,江南大学食品学院 食品科学与技术国家重点实验室 江苏 无锡 214122,江南大学食品学院 食品科学与技术国家重点实验室 江苏 无锡 214122,江南大学食品学院 食品科学与技术国家重点实验室 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 21276108) |
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| 摘 要： | 【目的】鉴定产油微生物高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b_5还原酶Ⅰ的功能。【方法】将高山被孢霉ATCC 32222中膜结合细胞色素b_5还原酶Ⅰ基因与人可溶性细胞色素b_5还原酶基因序列比对,去除该基因N端穿膜区域后,与人可溶性细胞色素b_5基因分别在大肠杆菌中异源表达;通过钴离子亲和层析、离子交换和分子排阻色谱等方法对表达产物进行纯化;以2,6-二氯靛酚钠(DCIP)为底物,测定细胞色素b_5还原酶Ⅰ的体外活性及其对NADH和NADPH的偏好性;在反应体系中存在NADH时,通过全波长扫描方法检测细胞色素b_5还原酶Ⅰ与细胞色素b_5的相互作用。【结果】高山被孢霉ATCC 32222中膜结合细胞色素b_5还原酶Ⅰ被成功可溶表达,经纯化后检测到体外活性:使用NADH时酶活为564.57 U,使用NADPH时为51.97 U;在NADH存在时,细胞色素b_5还原酶Ⅰ能够还原细胞色素b_5,其吸收峰从411 nm偏移至422 nm,并在521 nm和554 nm处吸光值增加。【结论】细胞色素b_5还原酶Ⅰ N端穿膜区域的去除增加了其可溶性,并保持了蛋白质活性;高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b_5还原酶Ⅰ基因编码的是一种NADH-细胞色素b_5还原酶,其在体外能与细胞色素b_5相互作用。
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| 关 键 词： | 细胞色素b5还原酶，细胞色素b5，高山被孢霉，脂肪酸脱饱和反应 |
Expression, purification and characterization of cytochrome b5 reductase I from Mortierella alpina ATCC 32222 |
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| WANG Ming-Xuan,CHEN Hai-Qin,GU Zhen-Nan,CHEN Wei and CHEN Yong-Quan.Expression, purification and characterization of cytochrome b5 reductase I from Mortierella alpina ATCC 32222[J].Microbiology,2016,43(10):2172-2178. |
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| Authors: | WANG Ming-Xuan CHEN Hai-Qin GU Zhen-Nan CHEN Wei and CHEN Yong-Quan |
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| Institution: | School of Food Science and Technology, State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China,School of Food Science and Technology, State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China,School of Food Science and Technology, State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China,School of Food Science and Technology, State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China and School of Food Science and Technology, State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cytochrome b5 reductase Cytochrome b5 Mortierella alpina Fatty acid desaturation |
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