| 高产青霉素酰化酶巨大芽胞杆菌的诱变选育及产酶条件优化 |
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| 引用本文： | 韩蕊,燕瑾,赵利维,张金秀,王立安.高产青霉素酰化酶巨大芽胞杆菌的诱变选育及产酶条件优化[J].微生物学通报,2015,42(9):1762-1769. |
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| 作者姓名： | 韩蕊 燕瑾 赵利维 张金秀 王立安 |
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| 作者单位： | 1. 河北师范大学 生命科学学院 河北 石家庄 050024,2. 北京鸿仪四方辐射技术股份有限公司 北京 101113,1. 河北师范大学 生命科学学院 河北 石家庄 050024,1. 河北师范大学 生命科学学院 河北 石家庄 050024；3. 南开大学 药物化学生物学国家重点实验室 天津 300071,1. 河北师范大学 生命科学学院 河北 石家庄 050024 |
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| 基金项目： | 河北省教育厅自然科学研究项目(No. QN20131028)；药物化学生物学国家重点实验室开放基金项目(No. 20130270)；河北师范大学科学研究基金项目博士科研启动基金项目(No. L2012B10) |
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| 摘 要： | 【目的】选育高产青霉素G酰化酶(PGA)工业菌株。【方法】采用LiCl-紫外线复合诱变以及常压室温等离子体(ARTP)诱变技术对巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium) ATCC 14945进行处理。处理菌体涂平板后，将长出的菌落接种到液体培养基中，向培养6 h后的二代菌液中添加终浓度为0.1%的苯乙酸，28 °C、250 r/min条件下诱导培养40 h。对离心后获得的上清(粗酶液)采用NIPAB法测定PGA酶活力。以PGA酶活力最高的菌株为材料，对苯乙酸最佳添加量和最佳诱导时间进行优化，采用NIPAB法测定PGA酶活力。采用SDS-PAGE检测诱变前后巨大芽胞杆菌粗酶液中PGA的蛋白特性。【结果】从诱变菌落中筛选到PGA酶活力为39.60 U/mL的菌株12-4，酶活力比出发菌株提高了8.5倍。该菌株在液体培养6 h后添加终浓度为0.2%的苯乙酸，继续培养50 h后，PGA酶活力可达78.45 U/mL，比出发菌株提高了16.8倍。诱变前后菌株培养液中的PGA蛋白均具α、β亚基；诱变后菌株PGA α亚基的量没有明显变化，β亚基的量明显增多；α、β亚基之间的蛋白条带明显增多。【结论】采用诱变技术可提高巨大芽胞杆菌PGA活性，获得的诱变菌株12-4及培养条件对PGA工业化生产具有重要价值。
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| 关 键 词： | LiCl-紫外线复合诱变，常压室温等离子体(ARTP)诱变，苯乙酸，青霉素G酰化酶，酶活力 |
Screening and culture optimization of Bacillus megaterium strains for penicillin G acylase production |
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| HAN Rui,YAN Jin,ZHAO Li-Wei,ZHANG Jin-Xiu and WANG Li-An.Screening and culture optimization of Bacillus megaterium strains for penicillin G acylase production[J].Microbiology,2015,42(9):1762-1769. |
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| Authors: | HAN Rui YAN Jin ZHAO Li-Wei ZHANG Jin-Xiu and WANG Li-An |
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| Institution: | 1. College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang, Hebei 050024, China,2. Beijing Hongyisifang Radiation Technology Co., Ltd, Beijing 101113, China,1. College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang, Hebei 050024, China,1. College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang, Hebei 050024, China; 3. State Key Laboratory of Medicinal Chemical Biology, Nankai University, Tianjin 300071, China and 1. College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang, Hebei 050024, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LiCl-ultraviolet composite mutagenesis Atmospheric and room temperature plasma (ARTP) mutagenesis Phenylacetic acid Penicillin G acylase (PGA) Enzyme activity |
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