| 葡萄溃疡病菌限制性内切酶介导整合方法的建立及转化子库的构建 |
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| 引用本文： | 张鑫,刘爱芬,张玮,严红,乔广行,燕继晔,李兴红.葡萄溃疡病菌限制性内切酶介导整合方法的建立及转化子库的构建[J].微生物学通报,2013,40(7):1272-1278. |
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| 作者姓名： | 张鑫 刘爱芬 张玮 严红 乔广行 燕继晔 李兴红 |
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| 作者单位： | 1. 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所 北京100097
2. 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所 北京100097;青岛农业大学农学与植物保护学院 山东青岛266109 |
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| 基金项目： | 国家葡萄产业技术体系专项资金资助项目(No. CARS-30); 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所创新基金项目 |
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| 摘 要： | 目的]摸索葡萄溃疡病菌(Lasiodiplodia theobromae)限制性内切酶介导整合(Restriction enzyme mediated integration,REMI)的转化方法,并构建CSS-01s (L.theobromae)的REMI转化子库.方法]利用REMI转化方法,将线性化的含有潮霉素抗性基因(Hygromycin phosphotransferase gene,Hyg)的pUCATPH质粒转化CSS-01s菌株的原生质体；测定其对潮霉素B的敏感浓度,摸索不同酶解液和酶解时间对原生质体制备的影响,统计不同限制性内切酶酶量对转化效率的影响,以摸索出的最优条件构建CSS-01s菌株的REMI转化子库,采用Southern blot的方法验证转化子.结果]首次建立了一套L.theobromae的REMI转化方法,经转化得到包含6 000余个转化子的L.theobromaeCSS-01s转化子库,随机挑选的5个转化子经Southern blot分析,质粒均插入到了Hind Ⅲ相应的酶切位点处.结论]浓度为2％崩溃酶+2％蜗牛酶酶混合液、酶解4h为原生质体获得的最优条件,每管转化体系中加入30 UHind Ⅲ时转化效率最高,该方法可以用来获得大量不同表型的REMI转化子.
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| 关 键 词： | 葡萄溃疡病菌 原生质体制备 REMI |
Establishment of restriction enzyme mediated integration and construction of transformants library in Lasiodiplodia theobromae |
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| ZHANG Xin,LIU Ai-Fen,ZHANG Wei,YAN Hong,QIAO Guang-Hang,YAN Ji-Ye and LI Xing-Hong.Establishment of restriction enzyme mediated integration and construction of transformants library in Lasiodiplodia theobromae[J].Microbiology,2013,40(7):1272-1278. |
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| Authors: | ZHANG Xin LIU Ai-Fen ZHANG Wei YAN Hong QIAO Guang-Hang YAN Ji-Ye and LI Xing-Hong |
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| Institution: | 1. Institute of Plant and Environment Protection, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Science, Beijing 100097, China;1. Institute of Plant and Environment Protection, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Science, Beijing 100097, China 2. College of Agronomy and Plant Protection, Qingdao Agricultural University, Qingdao, Shandong 266109, China;1. Institute of Plant and Environment Protection, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Science, Beijing 100097, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | L theobromae Protoplasts preparation REMI |
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