| 猪流行性腹泻病毒经其附属蛋白抑制细胞凋亡 |
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| 引用本文： | 王晨阳,司伏生,于瑞嵩,谢春芳,董世娟,宋增福,李震.猪流行性腹泻病毒经其附属蛋白抑制细胞凋亡[J].微生物学通报,2020,47(8):2484-2494. |
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| 作者姓名： | 王晨阳 司伏生 于瑞嵩 谢春芳 董世娟 宋增福 李震 |
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| 作者单位： | 1 水产科学国家级实验教学示范中心(上海海洋大学) 上海 201306;2 上海市农业科学院畜牧兽医研究所 上海 201106;2 上海市农业科学院畜牧兽医研究所 上海 201106;3 上海农业遗传育种重点实验室 上海 201106 |
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| 基金项目： | 上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字[2015]第6-1-9号); 国家自然科学基金(31572519)；国家重点研发计划(2016YFD0500101) |
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| 摘 要： | 【背景】orf3位于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) s基因与e基因之间,是目前发现的PEDV唯一一个附属基因,编码附属蛋白(ORF3蛋白)。我们前期研究初步发现ORF3蛋白对PEDV诱导的细胞凋亡有影响。【目的】研究ORF3蛋白在PEDV侵染复制过程中的毒力作用机制。【方法】实验用3种PEDV:rDR13att-?ORF3 (orf3基因全部敲除)、DR13-ORF3att (携带有C端截短orf3)、rDR13att-ORF3wt(携带全长orf3基因)感染Vero细胞,观察病变情况,再用活细胞成像仪、流式细胞仪、 DNA断裂的原位末端标记法terminaldeoxynucleotidyltransferase(TDT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]等方法检测不同感染时间点的细胞凋亡情况,然后用蛋白质印迹方法分析PEDV感染宿主细胞中主要凋亡相关蛋白(如Caspase-3)的活化或裂解,最后进行转录组测序研究病毒感染细胞中差异基因的表达情况,再用荧光定量PCR验证转录组结果。【结果】rDR13att-?ORF3引起较多的细胞病变,活细胞成像仪的动态观察结果显示,3种病毒侵染的细胞凋亡水平随着时间的延长均高于正常阴性细胞,但敲除orf3的病毒感染细胞后细胞凋亡率比其他两种病毒更高;敲除orf3病毒感染细胞凋亡率显著高于其他两种病毒;病毒rDR13att-?ORF3感染细胞后TUNEL阳性细胞数比DR13-ORF3att和rDR13att-ORF3wt更多;表达ORF3蛋白的重组PEDV可以抑制Caspase-3的活化;ORF3蛋白对受感染细胞Heat shock 70 kD protein 1B (HSP70)基因转录有促进作用,荧光定量PCR结果表明rDR13att-ORF3wt感染细胞的HSP70表达量高于rDR13att-?ORF3感染细胞。【结论】PEDV通过ORF3蛋白抑制细胞凋亡,而且这种作用可能是通过抑制Caspase-3的活化或增加HSP70的产生来完成的。
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| 关 键 词： | 猪流行性腹泻病毒，附属ORF3蛋白，功能，抑制，细胞凋亡 |
Porcine epidemic diarrhea virus inhibits cellular apoptosis via their accessory protein |
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| WANG Chen-Yang,SI Fu-Sheng,YU Rui-Song,XIE Chun-Fang,DONG Shi-Juan,SONG Zeng-Fu,LI Zhen.Porcine epidemic diarrhea virus inhibits cellular apoptosis via their accessory protein[J].Microbiology,2020,47(8):2484-2494. |
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| Authors: | WANG Chen-Yang SI Fu-Sheng YU Rui-Song XIE Chun-Fang DONG Shi-Juan SONG Zeng-Fu LI Zhen |
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| Institution: | 1 National Demonstration Center for Experimental Fisheries Science Education (Shanghai Ocean University), Shanghai 201306, China;2 Institute of Animal Husbandry & Veterinary Science, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201106, China;2 Institute of Animal Husbandry & Veterinary Science, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201106, China;3 Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding, Shanghai 201106, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Porcine epidemic diarrhea virus Accessory ORF3 protein Function Inhibition Apoptosis |
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