| 滑液支原体NADH氧化酶的酶学活性及亚细胞定位研究 |
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| 引用本文： | 李浩然,祁晶晶,王宇,尚原冰,王桂军,于圣青.滑液支原体NADH氧化酶的酶学活性及亚细胞定位研究[J].微生物学通报,2020,47(3):801-812. |
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| 作者姓名： | 李浩然 祁晶晶 王宇 尚原冰 王桂军 于圣青 |
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| 作者单位： | 1 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036;2 中国农业科学院上海兽医研究所 上海 200241,2 中国农业科学院上海兽医研究所 上海 200241,2 中国农业科学院上海兽医研究所 上海 200241,3 锦州医科大学畜牧兽医学院 辽宁 锦州 121000,1 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036,2 中国农业科学院上海兽医研究所 上海 200241 |
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| 基金项目： | 国家重点研发项目(2017YFD0500705)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2019JB11) |
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| 摘 要： | 【背景】许多研究表明,支原体的NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)不仅在胞浆中发挥生物酶学功能,也存在于细胞膜上发挥黏附宿主细胞功能。【目的】对滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的NOX进行酶学活性及亚细胞定位研究,分析其在MS致病过程中的潜在作用。【方法】对MS的NOX蛋白进行原核表达、纯化,然后对重组MSNOX (rMSNOX)的酶学活性及影响酶活的条件进行研究,测定其酶比活力、米氏常数及最大反应速率,接着用MS阳性血清及制备的rMSNOX兔多克隆抗体,分别与rMSNOX蛋白及MS全菌、膜蛋白和胞浆蛋白进行Western blotting反应,鉴定rMSNOX的免疫原性及其在MS中的分布情况。【结果】在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达rMSNOX蛋白,相对分子质量约为53 kD,并获得纯化的rMSNOX蛋白;酶活测定显示rMSNOX蛋白的酶比活力为14.17IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5,双倒数法求得rMSNOX的最大反应速率V_(max)为21.8μmol/(L·min),米氏常数K_m(NADH)为244.0μmol/L;rMSNOX蛋白与MS阳性血清特异性结合,证明具有良好的免疫原性;亚细胞定位研究表明NOX蛋白主要存在于MS的胞浆中,细胞膜上有少量的分布。【结论】首次证实MS的NOX不仅具有NADH氧化酶活性,也是MS具有免疫原性的膜蛋白,为进一步探索NOX在MS致病过程中的作用提供了分子基础。
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| 关 键 词： | 滑液支原体，NADH氧化酶，酶学活性，免疫原性，亚细胞定位 |
Enzymatic activity and subcellular localization analyses of the NADH oxidase in Mycoplasma synoviae |
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| LI Hao-Ran,QI Jing-Jing,WANG Yu,SHANG Yuan-Bing,WANG Gui-Jun and YU Sheng-Qing.Enzymatic activity and subcellular localization analyses of the NADH oxidase in Mycoplasma synoviae[J].Microbiology,2020,47(3):801-812. |
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| Authors: | LI Hao-Ran QI Jing-Jing WANG Yu SHANG Yuan-Bing WANG Gui-Jun and YU Sheng-Qing |
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| Institution: | 1 College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China;2 Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS), Shanghai 200241, China,2 Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS), Shanghai 200241, China,2 Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS), Shanghai 200241, China,3 College of Veterinary, Jinzhou Medical University, Jinzhou, Liaoning 121000, China,1 College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China and 2 Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS), Shanghai 200241, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycoplasma synoviae NADH oxdiase enzymatic activity immunogenicity subcellular localization |
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