| 密码子优化后的柞蚕溶菌酶在酵母中的表达及活性测定 |
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| 引用本文： | 刘真英,李文利.密码子优化后的柞蚕溶菌酶在酵母中的表达及活性测定[J].微生物学通报,2016,43(2):292-300. |
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| 作者姓名： | 刘真英 李文利 |
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| 作者单位： | 大连理工大学生命科学与技术学院 辽宁 大连 116023,大连理工大学生命科学与技术学院 辽宁 大连 116023 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 31201879) |
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| 摘 要： | 【目的】提高柞蚕溶菌酶在毕赤酵母中的表达量,对柞蚕溶菌酶活性进行测定。【方法】根据毕赤酵母密码子偏爱性对柞蚕溶菌酶基因进行优化,并在目的基因3′端加上6个组氨酸标签,优化后的基因克隆至表达p PIC9K载体中,并通过电转化的方法导入毕赤酵母GS115中。利用不同浓度梯度的G418进行高拷贝转化子的筛选,经甲醇诱导实现分泌表达。通过硫酸铵盐析、镍柱亲和层析等工艺分离纯化柞蚕溶菌酶,利用琼脂扩散方法测定柞蚕溶菌酶对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、苍白杆菌及过氧化醋杆菌的抑菌作用,利用比浊法测定酶活大小。【结果】密码子优化后的柞蚕溶菌酶在诱导温度25°C、甲醇量0.75%和p H 7.0条件下实现了最高表达,表达量达到了2.4 g/L,并且纯化后的柞蚕溶菌酶酶活达到23 970 U/mg。【结论】密码子优化后的柞蚕溶菌酶在毕赤酵母中实现了高效表达,纯化后的柞蚕溶菌酶对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、苍白杆菌及过氧化醋杆菌均有抑菌作用。
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| 关 键 词： | 密码子优化，柞蚕溶菌酶，毕赤酵母，抑菌作用 |
Expression and activity determination of codon optimized Antheraea pernyi lysozyme in Pichia pastoris |
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| LIU Zhen-Ying and LI Wen-Li.Expression and activity determination of codon optimized Antheraea pernyi lysozyme in Pichia pastoris[J].Microbiology,2016,43(2):292-300. |
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| Authors: | LIU Zhen-Ying and LI Wen-Li |
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| Institution: | School of Life Science and Biotechnology, Dalian University and Technology, Dalian, Liaoning 116023, China and School of Life Science and Biotechnology, Dalian University and Technology, Dalian, Liaoning 116023, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Codon optimization Antheraea pernyi lysozyme Pichia pastoris Antibacterial activity |
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