| AphA蛋白对副溶血弧菌vopT的转录调控研究 |
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| 引用本文： | 张伟,侯书宁,何婷,徐淼,黄新祥,杨瑞馥,周冬生,张义全.AphA蛋白对副溶血弧菌vopT的转录调控研究[J].微生物学通报,2015,42(10):1971-1976. |
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| 作者姓名： | 张伟 侯书宁 何婷 徐淼 黄新祥 杨瑞馥 周冬生 张义全 |
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| 作者单位： | 1. Department of Clinical Microbiology, the First Affiliated Hospital of Hebei North University, Zhangjiakou, Hebei 075000, China,2. School of Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang, Jiangsu 212013, China,2. School of Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang, Jiangsu 212013, China,2. School of Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang, Jiangsu 212013, China,2. School of Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang, Jiangsu 212013, China,3. State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of microbiology and Epidemiology, Beijing 100071, China,3. State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of microbiology and Epidemiology, Beijing 100071, China and 2. School of Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang, Jiangsu 212013, China；3. State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of microbiology and Epidemiology, Beijing 100071, China |
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| 基金项目： | 江苏大学高级人才科研启动基金项目(No. 14JD6166)；国家自然科学基金项目(No. 31170127) |
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| 摘 要： | 【目的】研究副溶血弧菌AphA对vopT的转录调控机制。【方法】提取野生株(WT)和aphA突变株(ΔaphA)的总RNA，采用引物延伸实验研究vopT的转录起始位点，并根据产物的丰度差异判断AphA对其调控关系。分别将WT和ΔaphA的总RNA逆转录成cDNA，利用实时定量RT-PCR进一步研究AphA对靶基因的调控关系。将vopT的启动子区克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游，构建LacZ重组质粒，并将该重组质粒转入WT和ΔaphA中，通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定AphA对vopT的调控关系。PCR扩增靶基因整个启动子区DNA序列，并纯化His-AphA蛋白，利用凝胶阻滞实验(EMSA)验证His-AphA对靶基因启动子区是否具有直接的结合作用。【结果】vopT只有一个转录起始位点A (?86)，且其转录活性受AphA的间接抑制。RT-PCR和EMSA结果显示AphA对vtrA的转录也具有间接的抑制作用。【结论】AphA间接抑制vopT转录，且该间接抑制作用与VtrA无关。
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| 关 键 词： | 副溶血弧菌，转录调控，AphA，vopT |
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