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检测蜜蜂急性麻痹病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法的建立和初步应用
引用本文:张体银,黄嫦娇,田国宁,林素洁,王武军,张志灯.检测蜜蜂急性麻痹病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法的建立和初步应用[J].微生物学通报,2021,48(12):5001-5007.
作者姓名:张体银  黄嫦娇  田国宁  林素洁  王武军  张志灯
作者单位:福州海关技术中心 福建省检验检疫技术研究重点实验室 福建 福州 350003;潍坊海关技术中心 山东 潍坊 261041
基金项目:福建省对外合作项目(2018I0022);福州海关科技计划项目(FK2020-21)
摘    要:背景] 蜜蜂急性麻痹病毒(Acute Bee Paralysis Virus,ABPV)是一种高毒力的蜜蜂病毒,可以引起蜜蜂的大批死亡和蜂群衰竭。目的] 建立一种快速、灵敏的ABPV实时荧光RT-PCR检测方法。方法] 根据ABPV衣壳蛋白基因保守序列设计引物和探针,通过对引物、探针浓度和退火温度等反应条件进行优化,建立基于TaqMan探针检测ABPV的实时荧光RT-PCR方法,并对方法的灵敏性、特异性和稳定性进行验证。结果] ABPV实时荧光RT-PCR检测方法在9.8×101-9.8×108 copies/μL之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2为0.998,扩增效率为103.8%。该方法的检测灵敏度为9.8 copies/μL;对其他蜜蜂病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性;重复性试验结果显示组内和组间的变异系数分别为0.19%-0.80%和0.57%-1.07%,重复性良好。对2018年-2019年在福建地区采集的70份蜜蜂样品进行ABPV检测,阳性率为2.86%。结论] 建立的ABPV实时荧光RT-PCR检测方法能用于该病的实验室检测、流行病学调查和疫情监测。

关 键 词:蜜蜂急性麻痹病毒  实时荧光RT-PCR  衣壳蛋白基因
收稿时间:2021/3/13 0:00:00

Establishment and preliminary application of a real-time RT-PCR assay with TaqMan probe for detecting acute bee paralysis virus
ZHANG Tiyin,HUANG Changjiao,TIAN Guoning,LIN Sujie,WANG Wujun,ZHANG Zhideng.Establishment and preliminary application of a real-time RT-PCR assay with TaqMan probe for detecting acute bee paralysis virus[J].Microbiology,2021,48(12):5001-5007.
Authors:ZHANG Tiyin  HUANG Changjiao  TIAN Guoning  LIN Sujie  WANG Wujun  ZHANG Zhideng
Institution:Fujian Provincial Key Laboratory of Inspection and Quarantine Technology Research, Technology Center of Fuzhou Customs, Fuzhou, Fujian 350003, China;Technology Center of Weifang Customs, Weifang, Shandong 261041, China
Abstract:
Keywords:acute bee paralysis virus  real-time RT-PCR  capsid protein gene
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