人脐带间充质干细胞来源的微囊泡提取和鉴定 |
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引用本文: | 姚嘉,唐晖,郑俊,张琪,杨扬,张英才.人脐带间充质干细胞来源的微囊泡提取和鉴定[J].中华细胞与干细胞杂志(电子版),2016(4):221-227. |
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作者姓名: | 姚嘉 唐晖 郑俊 张琪 杨扬 张英才 |
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作者单位: | 中山大学附属第三医院肝脏移植中心中山大学器官移植研究所;中山大学附属第三医院细胞生物治疗中心 |
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摘 要: | 目的研究分离和提纯人脐带间充质干细胞来源的微囊泡(hUC-MSCs-MVs)并分析其理化性质。方法 (1)运用Ⅰ型胶原酶联合透明质酸酶消化Wharton's Jelly组织的方法,分离和扩增人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs);(2)实验组:用"饥饿法"处理hUC-MSCs,分离和提纯hUC-MSCs-MVs;对照组:用未经"饥饿法"处理的hUC-MSCs来尝试提取hUCMSCs-MVs;(3)验证hUC-MSCs-MVs的理化性质和生物学特性。结果 (1)分离出的hUCMSCs状态良好,扩增后的子代hUC-MSCs数量及状态满足后续实验的要求。流式细胞术结果显示hUC-MSCs-MVs高表达CD44、CD29和CD73,而低表达α-6 integrin(CD49f)和HLAclassⅡ(HLA-DR)。(2)实验组成功分离和提纯了hUC-MSCs-MVs,而对照组未见确切hUCMSCs-MVs产生;扫描电镜观察到hUC-MSCs-MVs的囊泡样结构,直径几十到几百nm不等,均在1μm以下;透射电镜观察到hUC-MSCs-MVs的产生和胞吐作用;蛋白定量结果为1337.1μg/ml;流式细胞术结果显示其大小绝大部分在1μm以下,并能高表达CD44和CD29,而低表达CD73、α-6 integrin(CD49f)和HLA-classⅡ(HLA-DR)等表面分子。结论用"饥饿法"处理hUC-MSCs可成功获得hUC-MSCs-MVs。
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关 键 词: | 脐带 间质干细胞 微囊泡 |
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