拟南芥H~+-ATPase AHA11蛋白与钙结合蛋白CBL10的互作关系分析

采用分子克隆技术,从拟南芥中分离到一个质膜H~+-ATPase基因At AHA11和一个钙结合蛋白基因At CBL10。采用酶切连接的方法构建At AHA11-C-ter-p GADT7和At CBL10-p GBKT7酵母双杂交载体,用PEG/Li Ac法将At AHA11-C-ter-p GADT7转化到酵母菌Y187中,At CBL10-p GBKT7转化到酵母菌Y2HGold中。发现融合的二倍体酵母(At AHA11-C-ter-p GADT7×At CBL10-p GBKT7)可以在酵母选择性培养基SD-A-H-L-T+X-α-Gal+Ab A中生长。说明At CBL10蛋白可与AHA11蛋白的C末端互作,便于我们进一步研究它们的调节位点,为深入探讨CBL10调控细胞膜AHA11蛋白的功能提供一个技术平台。