| 摘 要： | 为建立山羊IL-2基因SYBR GREENⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据Gen Bank中山羊IL-2基因(登录号:KT934548),设计1对特异性引物,用于扩增目的基因,并将目的基因克隆于p MD-19-T载体,转化至大肠杆菌DH5α,经质粒PCR及序列测定鉴定后获得阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GREENⅠRTFQ-PCR标准曲线和溶解曲线,进行特异性、重复性和敏感性试验。并应用所建立的方法,检测Con A刺激健康山羊PBMC后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h和48 h不同时间点IL-2基因转录的动态变化。结果表明,当质粒标准品稀释度在7.2×10~9~7.2×10~5 copies/μL扩增曲线的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数为-0.996;熔解曲线为特异性单峰,组内变异系数为0.306%~1.458%,组间变异系数为0.514%~1.191%,最低检测限为7.2×10~2 copies/μL。山羊IL-2基因的mRNA转录量在0~2 h呈现上升趋势,在2 h达到峰值,2~6 h呈现下降趋势。6~12 h未能检测到IL-2基因的mRNA转录;12~48 h检测到IL-2基因的mRNA转录量呈逐渐上升趋势。研究结果将为山羊IL-2基因的定量分析提供技术平台。
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