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香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白(NSP)的纯化及抗血清制备
引用本文:余乃通,冯团成,王建华,刘志昕.香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白(NSP)的纯化及抗血清制备[J].基因组学与应用生物学,2010,29(2).
作者姓名:余乃通  冯团成  王建华  刘志昕
作者单位:1. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海口,571101;海南大学环境与植物保护学院,海口,570228
2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海口,571101
基金项目:国家科技支撑计划,中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 
摘    要:本研究以本实验室保存的含重组载体pDEST17-NSP的原核表达菌株E.coli BL21(DE3)为材料,于25℃、0.1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,集菌后超声波破碎,获得以包涵体形式表达的约20 kD的融合蛋白.实验结果表明,将沉淀的融合蛋白溶于含6 mol/L尿素的Binding Buffer中,再经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,可获得高纯度的融合蛋白.将纯化融合蛋白经12%SDS-PAGE电泳,切胶回收目的带,液氮研磨并按1:1(W/V)混合佐剂,4次免疫家兔,获得BBTV病毒核穿梭蛋白的特异性抗血清.以融合蛋白作抗原,间接ELISA法测定其抗血清效价为1:5 000.田间检测样品的最佳抗血清工作浓度为1:500.Western Blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合.本研究的结果将为下一步NSP基因转录调控和蛋白功能研究奠定一定基础.

关 键 词:香蕉束顶病毒  核穿梭蛋白  纯化  抗血清制备

NSP Protein Purification and Antiserum Preparation of Banana Bunchy Top Virus Isolate from Haikou
Yu Naitong,Feng Tuancheng,Wang Jianhua,Liu Zhixin.NSP Protein Purification and Antiserum Preparation of Banana Bunchy Top Virus Isolate from Haikou[J].Genomics and Applied Biology,2010,29(2).
Authors:Yu Naitong  Feng Tuancheng  Wang Jianhua  Liu Zhixin
Abstract:
Keywords:
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