| RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB |
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| 引用本文： | 唐志如,张友明,孙志洪,黄瑞林,印遇龙.RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB[J].基因组学与应用生物学,2009,28(3). |
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| 作者姓名： | 唐志如 张友明 孙志洪 黄瑞林 印遇龙 |
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| 作者单位： | 中国科学院亚热带农业生态研究所,长沙,410125 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家高技术研究发展计划(863计划)，中国科学院亚热带农业生态研究所青年人才领域前沿项目，中国科学院优秀博士学位论文和院长奖获得者科研启动专项基金 |
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| 摘 要： | RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cip和cipB,为发光光状杆菌基因敲除提供方法.采用TOPO克隆方法将基因cipA和cipB克隆到质粒pTA上,获得质粒pTA-cipA和pTA-cipB;采用Red/ET方法分别将Gentd基因和Aprd基因分别插入pTA-cipA和pTA-cipB的cipA和cipB基因中,并替换cipA和cipB基因部分序列,获得pTA-GentaIncipA和pTA-ApraIncipB;pTA-GentaIncipA通过BamH Ⅰ酶切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得GentaIncipA,将GentaIncipA导入带有质粒pASK-αβγA的P luminescens subsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipA:pTA-ApraInciB用EcoR Ⅰ酶切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得ApraIncipB,将ApraIncipB导入带有质粒pASK-αβγA的P.luminescens subsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipB;42℃下热激去除突变菌中的质粒pASK-αβγA.克隆PCR和SDS-PAGE电泳结果表明发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB均被敲除.采用RED同源重组法成功地敲除了发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB.
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| 关 键 词： | 发光光状杆菌 RED同源重组 敲除 晶体蛋白 |
Knockout of the Crystalline Inclusion Protein Gene cipA and cipB in Photorhabdus luminescens by RED Homologous Recombination |
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| Tang Zhiru,Zhang Youming,Sun Zhihong,Huang Ruilin,Yin Yulong.Knockout of the Crystalline Inclusion Protein Gene cipA and cipB in Photorhabdus luminescens by RED Homologous Recombination[J].Genomics and Applied Biology,2009,28(3). |
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| Authors: | Tang Zhiru Zhang Youming Sun Zhihong Huang Ruilin Yin Yulong |
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