扁桃CBF1转录因子的克隆及原核表达分析 |
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引用本文: | 张亮,李疆,代培红,李鹏,罗淑萍,彭弯弯.扁桃CBF1转录因子的克隆及原核表达分析[J].植物遗传资源学报,2015,16(3):612-617. |
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作者姓名: | 张亮 李疆 代培红 李鹏 罗淑萍 彭弯弯 |
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作者单位: | 1. 新疆农业大学农学院,乌鲁木齐,830052 2. 新疆农业大学林学与园艺学院,乌鲁木齐,830052 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(面上项目,重点项目,重大项目) |
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摘 要: | 为了探明CBF转录因子在扁桃中的抗寒分子机理,以新疆栽培扁桃‘矮丰’叶片为材料,通过PCR技术从扁桃基因组DNA中获得CBF1转录因子,命名为AF-Pd CBF1,Gen Bank登录号为KM245570。序列分析表明,该基因开放阅读框为729bp,编码242个氨基酸,推测蛋白质分子量为27.405 k D,并且该蛋白没有信号肽。进化树分析表明,AF-Pd CBF1与甜樱桃和中国梅的亲缘关系最近。将该基因片段连接到原核表达载体p ET-32a(+)中,构建融合表达质粒p ET-Pd CBF1,转化到E.coli Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白与预期大小一致,分子量大小约为47.8 k D。对重组蛋白的诱导条件进行优化后结果表明,重组蛋白p ET-Pd CBF1在IPTG浓度为0.2 mmol/L、诱导4 h时,其表达量最佳。试验结果可为进一步纯化和鉴定目的蛋白及研究其功能奠定基础。
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关 键 词: | 扁桃 CBF1转录因子 原核表达 |
收稿时间: | 2014/10/23 0:00:00 |
修稿时间: | 1/3/2015 12:00:00 AM |
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