| 重组抗A型肉毒毒素人鼠嵌合单克隆抗体的瞬时表达及中和活性研究 |
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| 作者姓名： | 秦海艳 南建军 熊颖 王建锋 陈继军 |
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| 作者单位： | 兰州生物制品研究所有限责任公司 第四研究室, 甘肃 兰州 730046 |
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| 基金项目： | 兰州市科技重大专项（2017-2-1）；甘肃省科技重大专项（1502FKDA008） |
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| 摘 要： | 为了制备重组抗A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin A,BoNT/A)人鼠嵌合单克隆抗体并分析中和活性,以BoNT/A作为抗原筛选鼠源抗BoNT/A噬菌体单链抗体库,将筛选得到的鼠源抗BoNT/A特异性单链抗体的重链和轻链可变区分别克隆到pGP5KCγ和pGP5KCκ载体构建表达质粒。表达质粒共转染HEK-293EBNA1细胞,瞬时表达抗BoNT/A人鼠嵌合单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。蛋白A亲和纯化mAb,分子排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)分析mAb纯度,小鼠中和试验评价mAb中和活性。结果显示,经过筛选得到4个序列正确且各不相同的抗BoNT/A单链抗体。4个抗BoNT/A人鼠嵌合mAb表达质粒均构建成功并转染HEK-293EBNA1细胞,根据转染效率指示绿色荧光蛋白的表达推测,50%～62. 5%的细胞表达抗BoNT/A抗体。表达上清经过蛋白A亲和纯化,浓度均200μg/mL,单体纯度均90%。小鼠中和试验显示mA1、mA2、mA3和mA4单株抗体均不能完全中和4 LD_(50)的A型肉毒毒素,但从延迟小鼠生存时间可以得出4个抗体的中和活性为mA3mA2mA1mA4。mA1、mA2、mA4中任何一个抗体与mA3连用中和活性为80 LD_(50)/mg。本研究制备了4个具有不同程度中和活性的抗BoNT/A人鼠嵌合mAb,为A型肉毒神经毒素鸡尾酒疗法奠定了基础。
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| 关 键 词： | A型肉毒毒素 人鼠嵌合 瞬时表达 中和活性 |
| 收稿时间： | 2020/3/27 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2020/5/21 0:00:00 |
Transient expression and neutralization activity of recombinant anti-botulinum neurotoxin type A human and mouse chimeric monoclonal antibody |
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| Authors: | QIN Haiyan NAN Jianjun XIONG Ying WANG Jianfeng CHEN Jijun |
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| Institution: | Fourth Department of Research, Lanzhou Institute of Biological Products Co., Ltd., Lanzhou 730046, Gansu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | botulinum neurotoxin A human and mouse chimera transient expression neutralization activity |
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