| PCR-RFLP和PCR-SSCP方法对弱精子症精子mtATPase6基因突变的检测 |
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| 引用本文： | 金龙金,张春玲,楼哲丰,张李雅,陈林丽,李玮,吕建新.PCR-RFLP和PCR-SSCP方法对弱精子症精子mtATPase6基因突变的检测[J].细胞生物学杂志,2007,29(4):573-578. |
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| 作者姓名： | 金龙金 张春玲 楼哲丰 张李雅 陈林丽 李玮 吕建新 |
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| 作者单位： | 温州医学院生命科学学院 浙江省医学遗传学重点实验室，温州医学院生命科学学院，浙江省医学遗传学重点实验室，温州医学院生命科学学院，生物学实验中心，温州医学院附属第一医院生殖医学中心，温州医学院生命科学学院，浙江省医学遗传学重点实验室，温州医学院生命科学学院，浙江省医学遗传学重点实验室，温州医学院生命科学学院，浙江省医学遗传学重点实验室，温州325035 |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金;浙江省温州市科技计划 |
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| 摘 要： | 为了检测弱精子症精子mtATPase6基因突变,采用PCR方法扩增了17例弱精子症mtDNA8602～9416区域815bp目的片段,用MspI和HaeⅢ限制性内切酶酶切,分别用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和单链构像多态性(SSCP)筛查突变。筛选出3例突变标本,经测序确认突变位点和突变性质。结果显示17例标本全部扩增出mtDNA8602～9416的815bp目的片段,PCR产物经MspI限制性内切酶酶切后电泳结果与剑桥序列预期酶切图谱相一致。PCR产物经HaeⅢ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上出现泳动带的异常,在17例弱精子症中共筛选出2例酶切片段异常标本。PCR-HaeⅢ酶切产物的SSCP电泳图谱分析结果显示,在PCR-RFLP(HaeⅢ)电泳图谱正常的15例弱精子症标本中筛选出1例异常。两种方法在弱精子症精子标本中筛选出mtATPase6基因突变3例(3/17,17.7%)。3例测序结果发现A8701G、C8943T、C8964T、T8966C、G9053A、C9060A、C9075T、A9120G、C9296T共9个点突变,其中A8701G、T8966C、G9053A三个突变为错义突变,其余均为同义突变。上述结果提示,弱精子症精子mtATPase6基因存在较高突变率;PCR-RFLP和PCR-SSCP能简单、快速、灵敏地筛选mtATPase6基因突变。
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| 关 键 词： | 弱精子症 点突变 |
| 修稿时间： | 2007-05-29 |
Detection of mtATPase6 Point Mutation on Asthenospermia by PCR-RFLP and PCR-SSCP |
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| Long-Jin Jin,Chun-Ling Zhang,Zhe-Feng Lou,Li-Ya Zhang,Lin-Li Chen,Wei Li,Jian-Xin Lu.Detection of mtATPase6 Point Mutation on Asthenospermia by PCR-RFLP and PCR-SSCP[J].Chinese Journal of Cell Biology,2007,29(4):573-578. |
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| Authors: | Long-Jin Jin Chun-Ling Zhang Zhe-Feng Lou Li-Ya Zhang Lin-Li Chen Wei Li Jian-Xin Lu |
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| Institution: | College of Life Sciences, Key Research Laboratory for Medical Genetics of Zhejiang; Central Laboratory of Biology; Reproductive Medicine Center, First Affiliated Hospital; Wenzhou Medical College, Wenzhou 325035, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mtATPase6 PCR-RFLP PCR-SSCP |
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