| 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白重组、表达与细胞毒活性鉴定 |
| |
| 引用本文： | 桂静,肖美英,楼永良,胡蝶,严杰,朱晔晶.创伤弧菌溶细胞素融合蛋白重组、表达与细胞毒活性鉴定[J].细胞生物学杂志,2008,30(1):89-94. |
| |
| 作者姓名： | 桂静 肖美英 楼永良 胡蝶 严杰 朱晔晶 |
| |
| 作者单位： | [1]温州医学院微生态学研究所,浙江省医学遗传学重点实验室,温卅I325035 [2]浙江大学医学院病原生物学教研室,杭州310031 |
| |
| 摘 要： | 研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用.诱导含pET-28a( )vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2 亲和层析方法对rVvhA进行纯化:利用分步稀释加透析相结合的方法进行蛋白质复性;绵羊红细胞裂解试验对复性后的rVvhA进行溶血活性初步测定:MTT法检测rVvhA对人ECV304细胞的体外毒性作用:应用Hochest33342/PI活细胞荧光双染及流式细胞术分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响.结果显示,用Ni2 -NTA His Band亲和层析柱纯化rVvhA纯度达88.6%左右;复性后的rVvhA有一定的溶血活性,其溶血活性具有时间.剂量依赖性;MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0 HU/ml rVvhA作用人ECV304 12 h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5 HU/ml rVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0 HU/ml rVvhA处理组加用40μmol/L caspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0 HU/ml rVvhA处理组有一定程度降低.rVvhA对人ECV304细胞具有诱导凋亡的生物学活性,推测诱导调亡途径可能与caspase家族有关.
|
| 关 键 词： | 创伤弧菌 溶细胞素 rVvhA 人ECV304细胞 细胞凋亡 caspase 创伤弧菌 溶细胞素 融合 蛋白重组 表达 细胞毒 活性鉴定 Fusion Protein Bioactivity Expression 家族 调亡 生物学活性 程度 凋亡率 酶抑制剂 caspase 处理 对照组 细胞诱导凋亡 |
| 修稿时间： | 2007年10月19 |
Recombination Expression and Cytolytic Bioactivity of vvhA Fusion Protein: Cytolysin of V.vulnificus |
| |
| Jing Gui,Mei-Ying Xiao,Yong-Liang Lou,Die Hu,Jie Yan,Ye-Jing Zhu.Recombination Expression and Cytolytic Bioactivity of vvhA Fusion Protein: Cytolysin of V.vulnificus[J].Chinese Journal of Cell Biology,2008,30(1):89-94. |
| |
| Authors: | Jing Gui Mei-Ying Xiao Yong-Liang Lou Die Hu Jie Yan Ye-Jing Zhu |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
