| 应用滤纸吸附-PCR法和改进的亚克隆方法快速筛选克隆甜橙细胞壁酸性转化酶基因(CS-CWI) |
| |
| 引用本文： | 安新民,徐昌杰,张上隆,陶俊,陈俊伟.应用滤纸吸附-PCR法和改进的亚克隆方法快速筛选克隆甜橙细胞壁酸性转化酶基因(CS-CWI)[J].细胞生物学杂志,2003,25(1):59-62. |
| |
| 作者姓名： | 安新民 徐昌杰 张上隆 陶俊 陈俊伟 |
| |
| 作者单位： | 浙江大学华家池校区园艺系，杭州310029 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目(批准号:39730340,30170648)资助 |
| |
| 摘 要： | 根据GenBank中已知的植物细胞壁转化酶基因的保守区序列设计一对PCR引物，分别以滤纸（吸附有甜橙基因组噬菌体库LB平板的噬菌体）和Top agarose（滤纸吸附后的LB平板）的SM洗脱液为模板，仅通过7次PCR就快速、准确、经济地筛选出CSCWI阳性克隆。提取该阳性克隆的DNA并进行BamHⅠ 和HindⅢ双酶切，通过PCR方法鉴定阳性酶切条带并回收，利用TaqDNA聚合酶的聚合活性和3'末端转移酶活性，改变该片段使其含有3'腺苷酸（A）突出末端，与pUCm-T载体实现了高效连接。阳性噬菌斑克隆及阳性条带的正确性得到测序的验证，表明滤纸吸附-PCR法和改进的亚克隆方法可正确和高效地应用于PCR筛选库和亚克隆。
|
| 关 键 词： | 滤纸吸附－PCR法 亚克隆方法 快速筛选 克隆甜橙 细胞壁酸性转化酶基因 CS－CWI PCR筛选文库 |
| 修稿时间： | 2002年3月4日 |
QUICK SCREENING CITRUS SINENSIS GENOMIC DNA LIBRARY AND CLONING BY FILTER PAPER ABSORPTION-PCR AND IMPROVED SUBCLONING METHOD |
| |
| AN Xin Min XU Chang Jie ZHANG Shang Long TAO Jun CHEN Jun Wei.QUICK SCREENING CITRUS SINENSIS GENOMIC DNA LIBRARY AND CLONING BY FILTER PAPER ABSORPTION-PCR AND IMPROVED SUBCLONING METHOD[J].Chinese Journal of Cell Biology,2003,25(1):59-62. |
| |
| Authors: | AN Xin Min XU Chang Jie ZHANG Shang Long TAO Jun CHEN Jun Wei |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Filter paper absorption PCR DNA library screen Subclone |
| 本文献已被 CNKI 维普 等数据库收录！ |
