家兔胚胎细胞核移植的研究 |
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引用本文: | 周琪,谭景和,等.家兔胚胎细胞核移植的研究[J].发育与生殖生物学报,1998,7(2):15-20. |
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作者姓名: | 周琪 谭景和 |
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作者单位: | 东北农业大学生物工程系,中国哈尔滨150030 |
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摘 要: | 本研究以兔为实验材料,对细胞核过程中显微操作、电融合、电活化以及移核胚的培养等基本问题进行了研究。对兔进行PMSG-hCG超数排卵,收集成熟母细胞和16-细胞胚;后者经胰蛋白酶消化,去除胶膜和透明带,在不含Ca62 、Mg^2 的分离中分成单个卵裂球;然后,分别对两者做CB预处理;首次尝试采用WQilladsen法,去除卵母细胞核、并将单个卵裂球注入透明带,同时、与McGrath-Solter法进行比较;通过电融合使供体核进入去核的卵母细胞内;将所得移核胚在体外或在中间内体内培养并观察。结果表明:一、Willadsen法与McGrath-Solter法比较,核移植操作的成功率及以后的电融合率均无明显差异(Tab.1)。相对于后者,Willadsen法更简便、易于掌握并提高去核率。二、hCG超排注射后13-15h,观察卵母细胞发现:其中,67.8%保留有第一极体。此时的卵子若去除1/3胞质量,去核率可以达到58.3%。若推迟去核时间,第一极体退化,失去去核标志。三、比较不同电脉冲条件,发现强度为0.63kv/cm,持续160μs的一次电脉冲可获较高移核胚的融合率(70.8%)(Tab.2);并可使61.1%的成熟卵母细胞活化。四、比较移核胚在体外和在中间有体内两种培养条件,前者只有34.6%能发育到6-8细胞期,而后者有23.0%能发育到桑椹胚或囊胚(Tab.3)。说明:需进一步优化家兔胚体外培养条件。
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关 键 词: | 家兔 胚胎培养 细胞核移植 |
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