二倍体马铃薯蛋白酶抑制剂II基因的克隆、序列分析及表达载体的构建

根据GenBank发表的四倍体马铃薯栽培种(Solanum.tuberosum)来源的马铃薯蛋白酶抑制剂II基因序列，用PCR方法从二倍体马铃薯IVP101（Solanum.phurejia）cDNA文库和基因组DNA扩增得到马铃薯蛋白酶抑制剂II的cDNA和DNA，命名为PINII-2x。测序表明，PINII-2x基因组DNA全长580 bp,含有一个115 bp的内含子，cDNA有462 bp(除去终止密码子)。推测的PINII-2x分子量是16.6 kD,等电点6.08。与其他马铃薯蛋白抑制剂II同源性比较表明，核苷酸同源性高达88%;推测的氨基酸序列同源性为93%,并具有相同的活性中心。RT-PCR表明，PINII-2x的mRNA在叶片中具有强烈的伤害诱导表达特性。同时，构建了分别以水稻ActI启动子和玉米Ubi启动子驱动PINII-2x基因的双元载体。