利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤 |
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引用本文: | 曾位森,夏宁邵,罗琛,谢卫兵,丁亮,黄宗平,曾定.利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤[J].遗传,1999,21(3):5-8. |
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作者姓名: | 曾位森 夏宁邵 罗琛 谢卫兵 丁亮 黄宗平 曾定 |
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作者单位: | 1. 第一军医大学生物与遗传教研室,广州,510515 2. 厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室,厦门,361005 |
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基金项目: | 厦门大学肿瘤细胞工程教育部开放研究实验室资助课题 |
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摘 要: | DNA损伤的检测对预防癌症和遗传病等非常重要。采用分子克隆技术,将报告基因—绿色荧光蛋白(GFP)置于SV40基本启动子调控下,构建成对照载体pSV-GFP。在SV40基本启动子上游插入寡核苷酸P53RE,构建成示踪载体p53RE-GFP。转染NIH3T3细胞,以GFP示踪细胞内源性P53的转录激活活性。紫外线照射或H2O2处理转化细胞使DNA损伤,诱导细胞内源性P53的表达。用激光扫描共聚焦成像系统(LSCIS)对细胞进行红、绿、蓝三色光融合成像,并测定GFP经488nm激发后发出的绿色荧光光密度,验证GFP示踪P53的特异性。p53RE-GFP转化细胞3T3-REG经紫外线照射或H2O2处理后,GFP的表达增高,处理后1hr光密度即达到最高水平,随后逐渐降低。血清“饥饿”—非DNA损伤处理的3T3-REG细胞,以及经紫外和H2O2处理的对照载体pSV-GFP转化细胞3T3-SVG,GFP的表达无明显增强。实验表明:GFP示踪内源性P53转录激活活性用于检测DNA损伤有很高的灵敏度和特异性,适宜推广应用。
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关 键 词: | 绿色荧光蛋白,P53,DNA损伤,检测 |
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