利用TALEN技术在牛胎儿成纤维细胞中敲除Myostatin基因 |
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引用本文: | 杨翠翠,佟慧丽,马兴红,杜巍,刘丹,杨宇,严云勤.利用TALEN技术在牛胎儿成纤维细胞中敲除Myostatin基因[J].遗传,2014(7). |
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作者姓名: | 杨翠翠 佟慧丽 马兴红 杜巍 刘丹 杨宇 严云勤 |
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作者单位: | 东北农业大学生命科学学院; |
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基金项目: | 国家转基因专项(编号:2011ZX08007-002)资助 |
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摘 要: | 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因能够负向调节骨骼肌的生长和发育,牛MSTN基因突变会出现"双肌"特征。文章利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)靶向敲除牛胎儿成纤维细胞的MSTN基因,获得敲除MSTN基因的细胞系,为制备MSTN基因敲除牛提供材料。构建一对MSTN基因的TALENs真核表达载体,分别采用PEI转染试剂和电穿孔法进行牛胎儿成纤维细胞的转染,测序结果表明TALEN技术可用于敲除牛MSTN基因,利用T7核酸内切酶1(T7E1)检测其突变效率,结果显示电穿孔转染的敲除效率为20.4%。通过有限稀释法,共获得10个MSTN基因敲除的细胞克隆(包括MSTN-/-和MSTN+/-),其靶位点敲除的碱基数分别是1~20不等,部分会出现移码突变。出现移码突变的细胞系可用于MSTN基因敲除的转基因肉牛的制备。
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关 键 词: | TALENs 牛 Myostatin 敲除 转染 |
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