具血型转换功能的咖啡α-半乳糖苷酶基因的克隆与表达 |
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引用本文: | 梁素钰,郑学勤.具血型转换功能的咖啡α-半乳糖苷酶基因的克隆与表达[J].遗传,2005,27(5):759-764. |
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作者姓名: | 梁素钰 郑学勤 |
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作者单位: | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 热带作物生物技术国家重点实验室,海口 571101 |
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摘 要: | 从大粒种咖啡(Coffea liberica)和中粒种咖啡(Coffea canephora)中分离克隆到了α-半乳糖苷酶(α-D-galactosidase)cDNA的开放阅读框架即编码区,分别记为Gal-D与Gal-Z,长度与已发表的小粒种咖啡cDNA编码序列相同均为1 089 bp,同源性与已发表的小粒种咖啡cDNA编码序列相比分别为98.7%和99.27%。 将克隆到的Gal-D与Gal-Z用巴斯德毕赤氏酵母Pichia pastoris表达载体pPICZαA(分泌甲醇诱导型)和pGAPZαA(分泌组成型)成功地构建了如下酵母表达载体:pPICZαA/Gal-Z,pPICZαA/Gal-D和pGAPZαA/Gal-D,并转入酵母宿主菌GS115进行了发酵表达研究。实验得出工程菌株pPICZαA/Gal-D / GS115的重组表达产物酶活最高可达48.22(U/mL),对发酵产物进行了SDS-PAGE电泳,得到一条清晰的主条带。
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关 键 词: | α-半乳糖苷酶 cDNA克隆 咖啡豆 B→O血型转换 P. pastoris |
文章编号: | 0253-9772(2005)05-0759-06 |
收稿时间: | 2004-08-23 |
修稿时间: | 2004-11-12 |
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