| 山羊与牛乳腺差异表达基因的筛选及半定量RT-PCR分析 |
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| 引用本文： | 张娟,罗军,武会娟,刘俊霞,绳贺军,韩雪峰,张宁,余刚,王海滨.山羊与牛乳腺差异表达基因的筛选及半定量RT-PCR分析[J].动物学报,2007,53(4):710-716. |
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| 作者姓名： | 张娟 罗军 武会娟 刘俊霞 绳贺军 韩雪峰 张宁 余刚 王海滨 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌,712100 |
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| 基金项目： | 教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-05-0857)~~ |
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| 摘 要： | 山羊和奶牛具有非常相似的泌乳过程,但在产乳量和乳成分(脂肪和蛋白含量)之间存在很大的差异,而且山羊奶还具有特殊的膻味。本研究根据山羊和牛在基因编码序列上具有非常高的保守性原理,利用抑制消减杂交技术对3只西农萨能奶山羊和3头荷斯坦奶牛泌乳末期的乳腺组织进行差异表达基因分析。分别提取山羊和牛乳腺组织总RNA,分离mRNA并合成cDNA,以山羊乳腺组织cDNA作为测试,牛的乳腺组织cDNA作为对照。cDNA经RsaⅠ酶切后将测试组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增。随机挑选克隆经PCR鉴定发现有150个克隆具有200bp-1000bp插入片段,挑选50个差异片段不等的克隆进行测序及同源性分析,结果得到5个已知乳蛋白(αs2酪蛋白、β酪蛋白、К酪蛋白、α乳清白蛋白和β乳球蛋白)基因的编码序列和6个新的EST序列,EST序列已登录GenBank,登录号分别为EG588067、EG588068、EG588069、EG588070、EG588071和EG588072。通过半定量RT-PCR分析,发现β酪蛋白基因mRNA表达量在山羊乳腺中显著高于其在牛乳腺中的表达量,К酪蛋白在乳腺中的mRNA含量与其所表达的蛋白质在乳中含量存在很大差异,表明К酪蛋白虽然和其他酪蛋白具有相同的调控机制,但其在分泌和运输机制上与其他酪蛋白不同。
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| 关 键 词： | 羊 乳腺 差异表达基因 SSH 半定量分析 |
| 修稿时间： | 2007-04-032007-05-22 |
Screening and semi-quantitative RT-PCR analysis of differentially expressed genes in mammary glands between goat and cow |
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| ZHANG Li-Juan,LUO Jun,WU Hui-Juan,LIU Jun-Xia,SHENG He-Jun,HAN Xue-Feng,ZHANG Ning,YU Gang,WANG Hai-Bin.Screening and semi-quantitative RT-PCR analysis of differentially expressed genes in mammary glands between goat and cow[J].Acta Zoologica Sinica,2007,53(4):710-716. |
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| Authors: | ZHANG Li-Juan LUO Jun WU Hui-Juan LIU Jun-Xia SHENG He-Jun HAN Xue-Feng ZHANG Ning YU Gang WANG Hai-Bin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Goat Mammary gland Differential expression gene SSH Semi-quantitative analysis |
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