| 绿色木霉葡聚糖内切酶EGIII基因在大肠肝菌中的表达、定点突变及其动力学特性的研究 |
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| 引用本文： | 黄艳燕,左文朴,秦国梅,韦宇拓,杜丽琴,庞宗文,黄日波.绿色木霉葡聚糖内切酶EGIII基因在大肠肝菌中的表达、定点突变及其动力学特性的研究[J].工业微生物,2009,39(5). |
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| 作者姓名： | 黄艳燕 左文朴 秦国梅 韦宇拓 杜丽琴 庞宗文 黄日波 |
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| 作者单位： | 1. 广西大学生命科学与技术学院,广西南宁,530004
2. 广西大学生命科学与技术学院,广西南宁,530004;广西科学院,广西南宁,530006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，广西科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 将绿色木霉葡聚糖内切酶EGIII基因亚克隆到表达载体pET-22b(+),构建重组质粒pET-egl3,转化到大肠杆菌BL21(DE3).利用金属亲和层析对重组EGIII进行纯化,纯化后酶比活力达到6 U/mg蛋白,最适反应温度为60 ℃,最适pH为4.0.同时对EGIII催化区的氨基酸残基R130和E218进行定点饱和突变,各筛选到一株酶活有提高的突变子R130P和E218F,其比活力为野生型EGIII的2.8倍和3.45倍.突变酶E218F的Km提高了一倍,催化效率Kcat提高了5.4倍;而R130P的Km和Kcat没有明显变化.两个突变酶的最适酶解温度和pH分别都提高至65 ℃和4.4.
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| 关 键 词： | 绿色木霉 葡聚糖内切酶III 大肠杆菌 定点饱和突变 |
Eexpression in E.coli, site-directed mutagenesis and kinetics analysis of endoglucanase III from Trichoderma viride |
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