| 巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的定点突变及其动力学性质研究 |
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| 引用本文： | 周丽萍,周政,袁中一.巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的定点突变及其动力学性质研究[J].工业微生物,2003,33(1):9-13. |
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| 作者姓名： | 周丽萍 周政 袁中一 |
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| 作者单位： | 1. 江苏大学医学技术学院,江苏,镇江,212001
2. 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,上海,200031 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (No .30 10 0 0 2 9) |
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| 摘 要： | 为了提高青霉素G酰化酶（PGA）在酸性及有机溶剂中的稳定性，以大肠杆菌的晶体结构为模板，用软件PMODELING同源模建巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的三维结构结构并且选择PGA分子表面的合适碱性氨基酸突变为丙氨酸，通过三种不同的快速PCR介导定位突变的方法，将位于PGA的α亚基21位、128位和β亚基492位、512位的赖氨酸残基分别突变为丙氨酸，获得四个突变酶Kα021A、Kα128A、Kβ492A和Kβ512A。其中Kα128A和Kβ512A保持与野生型相近的酶活力，其动力学性质如最适温度、最适pH,Km及Kcat没有明显变化；突变酶Kα021A和Kβ492A则丧失 了酶活力。上述结果表明，PGA分子表面非活性中心的赖氨酸→丙氨酸点突变使突变子的性状发生了分化，突变效应呈现出丰富的多样性。该有理设计不但可以提高酶的稳定性，而且为揭示PGA结构和功能的关系提供了一个新的研究模型。
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| 关 键 词： | 巨大芽孢杆菌 青霉素G酰化酶 定点突变 动力学性质 |
Site-directed mutagenesis of B. megaterium penicillin G acylase and its kinetics |
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| ZHOU Li-ping ,ZHOU Zheng ,YUAN Zhong-yi.Site-directed mutagenesis of B. megaterium penicillin G acylase and its kinetics[J].Industrial Microbiology,2003,33(1):9-13. |
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| Authors: | ZHOU Li-ping ZHOU Zheng YUAN Zhong-yi |
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| Institution: | ZHOU Li-ping 2,ZHOU Zheng 1,YUAN Zhong-yi 1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | B megaterium penicillin G acylase site-directed mutagenesis |
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